1.一種白及多倍體植株的培育方法,所述方法包括:
(1)將消毒后的白及種子抖入秋水仙素溶液中,黑暗條件下培養6~8d
后,離心、洗滌去除秋水仙素;所述秋水仙素溶液濃度為0.1~0.4%,
pH5.8~6.2,溶劑為1/2MS或MS培養液;
(2)將秋水仙素處理過的白及種子轉接到白及種子萌發培養基中,先
于培養箱中黑暗條件下培養5~6d,再移至培養室,培養溫度23~27℃,
光照度2000~2500lx,光照12h/d,培養三個月得到多倍體白及幼苗;
所述白及種子萌發培養基組成如下:1-萘乙酸0.2~0.5mg/L,pH5.8~6.2,
溶劑為1/2MS或MS培養液;
(3)將上述培養得到的白及幼苗,挑選出莖變粗、葉片加厚、葉色
加深的植株,轉接到白及增殖培養基中進行穩定擴繁,選取2~3代性狀穩
定的植株進行多倍體的鑒定;所述白及增殖培養基組成如下:6-芐氨基嘌
呤1.0~2.0mg/L,1-萘乙酸0.1~0.5mg/L,pH5.8~6.2,溶劑為1/2MS或MS
培養液;
(4)鑒定為多倍體的植株轉接到生根壯苗培養基中進行培養,即獲
得白及多倍體植株的幼苗;所述生根壯苗培養基組成如下:1-萘乙酸
0.5~0.6mg/L,香蕉汁5~10%,pH5.8~6.2,溶劑為1/2MS或MS培養液;
所述的MS培養液配方如下:
大量元素母液:NH4NO3?16.5g;MgSO4·7H2O?3.7g;KH2PO4?1.7g;
KNO3?19g,加水溶解,定容至500ml;
鈣鹽母液:CaCl23.32g,加水溶解,定容至500ml;
微量元素母液:KI?0.0415g;Na2MoO4·2H2O?0.0125g;H3BO3?0.31g;CuSO4
·5H2O?0.00125g;MnSO4·H2O?0.845g;CoCl2·6H2O?0.00125g;ZnSO4·
7H2O?0.43g,加水溶解,定容至500ml;
鐵鹽母液:EDTA二鈉3.725g,加100ml水加熱溶解,FeSO4·7H2O
2.785g,加100ml水溶解后兩者混勻,加水配成500ml;
維生素母液:鹽酸吡哆醇0.025g;鹽酸硫胺素0.025g;煙酸0.025
g,甘氨酸0.1g,加水溶解,定容至500ml;
配1LMS培養液:取大量元素母液50ml,鈣鹽母液50ml,微量元素母
液10ml,維生素母液10ml,鐵鹽母液5ml,加肌醇0.1g,蔗糖或白砂糖
20~30g,蒸餾水定容至1L;
所述1/2MS指MS培養液中所含的大量元素和鈣鹽為MS培養液的一半,
其他不變。
2.如權利要求1所述的方法,其特征在于步驟(1)所述消毒方法如下:
取白及蒴果,用洗衣粉浸泡8~10min,自來水沖洗5min,然后用75%
乙醇消毒2~3min,無菌水沖洗,0.1%升汞消毒15~20min,無菌水沖洗,無菌吸水紙將蒴果表面殘留的水吸干,消毒后的白及蒴果切開即獲得
消毒后的白及種子。
3.如權利要求1所述的方法,其特征在于步驟(1)所述消毒方法如下:
白及蒴果切開,取白及種子,加入75%乙醇,10s后立即加入無菌水,
離心或過濾,取白及種子加入0.1%升汞溶液,5min后加入無菌水,離
心或過濾,取白及種子用無菌吸水紙上吸干,即得消毒后的白及種子。
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