本發明涉及一種雙歧乳桿菌V9的高密度發酵方法及其凍干菌粉的制備方法，屬于益生菌發酵領域。雙歧乳桿菌V9（Bifidobacterium？animalis？subsp.lactis？V9，Bifidobacterium？lactis？V9）是從健康蒙古族兒童腸道中分離得到的耐酸和耐膽鹽的益生菌，保藏編號為CGMCC？No.5470。雙歧乳桿菌V9在優化培養基和發酵條件控制下實現菌體高密度發酵，發酵液活菌數可達2.0×10cfu/ml以上，該發酵液制備的雙歧乳桿菌V9凍干菌粉中活菌總數可以達到6.0×10cfu/g以上，可應用于益生菌發酵劑或益生菌制劑。

1.一種乳雙歧桿菌的高密度發酵方法，其特征在于，發酵過程中發酵條件控制為：發酵
前期，30-35℃恒溫培養，自然發酵至pH為5.0-5.8；再調整發酵溫度為33-37℃恒溫培養，
并控制pH保持5.4～6.0，保持厭氧發酵；當菌體產酸停止時終止發酵，發酵液活菌數達到
2.0×10¹⁰cfu/ml以上；所述乳雙歧桿菌保藏編號為CGMCCNo.5470乳雙歧桿菌；所述發酵過
程中發酵培養基組成如下：乳糖8.0～12.0kg，牛肉膏2.0～7.0kg，酵母粉2.0～7.0kg，酪
蛋白胨8.0～12.0kg，大豆蛋白胨2.0～7.0kg，KH₂PO₄1.0～4.0kg，K₂HPO₄1.0～4.0kg，MgSO₄
0.05～0.15kg，吐溫-800.15～0.35kg，L-半胱氨酸鹽酸鹽0.2～0.7kg，碳酸鈣0.8～1.2kg，
蒸餾水1000L，混合均勻后調pH值為6.5，121℃下滅菌15min。
2.如權利要求1所述的一種乳雙歧桿菌的高密度發酵方法，其特征在于，所述控制pH保
持5.4～6.0是通過流加中和劑的方法控制，所述中和劑是NaOH溶液、KOH溶液、Na₂CO₃溶液
或氨水溶液中的任意一種。
3.如權利要求1所述的一種乳雙歧桿菌的高密度發酵方法，其特征在于，所述厭氧發酵
是通過通氮氣0.02～0.05vvm或每兩個小時通氮氣一次的方法實現。
4.如權利要求1所述的一種乳雙歧桿菌的高密度發酵方法，其特征在于，所述乳雙歧桿
菌CGMCCNo.5470在發酵過程前還經過種子液的制備，是在權利要求1所述培養基中37℃厭
氧培養至pH值為4.5～4.8時停止。
5.利用權利要求1-4任一方法得到的發酵液制備乳雙歧桿菌凍干菌粉的方法，包括如下
步驟：
a.菌體濃縮：高密度發酵液經8000～12000g離心濃縮菌體；
b.添加保護劑：菌體濃縮液添加3～8倍的保護劑溶液；
所述保護劑溶液的組成如下：脫脂乳10-15kg，乳糖8-12kg，維生素C1-2kg，谷氨酸
鈉1-2kg，蒸餾水1000L；
c.干燥：將上述添加保護劑后的菌懸液經冷凍干燥得到凍干菌粉，菌粉中活菌總數達到
6.0×10¹¹cfu/g以上。