1.一種枯草芽孢桿菌的混菌協同發酵方法，其特征在于：選取三株不同類型枯草芽孢桿
菌：保藏號為CGMCC?NO.0954的枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）B9601-Y2、保藏號為
CGMCC?No.1019的枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）NCD-2和保藏號為CGMCC?No.2099
枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）BAB-1，采用混合發酵工藝，通過對所述三株菌株的適宜培
養基選擇，混菌發酵工藝參數：pH值、溫度、通氣量及三株菌的接種量比例的控制，能夠穩
定的獲得枯草芽孢桿菌組合的發酵液，其中有益微生物的有效活菌數≥1012cfu/ml。
2.根據權利要求1所述的一種枯草芽孢桿菌的混菌協同發酵方法，其特征在于：發酵工
藝包括以下步驟：
步驟一、種子活化
將三種發酵菌株：Bacillus?subtilis?B9601-Y2、Bacillus?subtilis?NCD-2和Bacillus?subtilis?
BAB-1分開培養，分別劃線于種子活化培養基試管斜面上，在28~30℃培養箱中培養24~48h，
得到供三種生產用的斜面菌種；
步驟二、一級種子液制備
將步驟一中所述的三種斜面菌種分開培養，用接種環分別挑取所述斜面菌種單菌落，接
種于裝有一級種子培養基的三角瓶中，進行搖瓶培養，一級種子培養基的裝液量為三角瓶體
積的20~30%，在28~30℃下180~200r/min振蕩培養18~24h，得到所述三種發酵菌株的一級
種子液；
步驟三、二級種子液制備
將所述三種一級種子液分開培養，分別按照二級培養基2~5%的接種量，所述百分比為體
積體積比，接入裝有二級種子培養基的三角瓶，二級種子培養基的裝液量為三角瓶體積的
20~30%，于28~30℃、180~200r/min振蕩培養18~24h，得到所述三種發酵菌株的二級種子液；
步驟四、種子罐培養
將所述三種二級種子液共同混合培養，分別按照菌液體積比例的量接種到種子罐中，總
接種量是種子罐培養基體積的3~10%，所述百分比為體積體積比，好氧培養一段時間后，得
到三級種子液；
步驟五、發酵罐培養
將所述三級種子液，按照發酵罐培養基的3~10%的接種量接種到發酵罐中，所述百分比
為體積體積比，好氧培養一段時間后，得到發酵產物。
3.根據權利要求2所述的一種枯草芽孢桿菌的混菌協同發酵方法，其特征在于：所述供
生產用的斜面菌種在冰箱內保存最多不超過一周。
4.根據權利要求2所述的一種枯草芽孢桿菌的混菌協同發酵方法，其特征在于：二級種
子液經顯微鏡觀察菌形正常，無雜菌污染，培養液含活菌數≥1012cfu/ml，方可作為合格的二
級種子應用。
5.根據權利要求1或2所述的一種枯草芽孢桿菌的混菌協同發酵方法，其特征在于：培
養基配方：
（1）其中所述的種子活化培養基為：牛肉膏3~5g/L，蛋白胨3~5g/L，氯化鈉3~5g/L，
葡萄糖5~10g/L，瓊脂10~15g，pH7.0~7.2；
（2）其中所述的一級和二級種子培養基為：葡萄糖20~40g/L，蛋白胨6~10g/L，酵母
浸膏6~10g/L，氯化鈉5g/L，pH7.0~7.2；
（3）其中所述的種子罐和發酵罐培養基為：豆餅粉3~20g/L，牛肉膏2~5g/L，酵母浸
膏3~5gL，尿素5~10g/L,玉米粉3~20gL，蜂蜜5~10gL，麩皮5~10g/L，氯化鈉0.5~3g/L，
碳酸鈉1~2g/L，磷酸氫二鉀1~2g/L，硫酸鎂0.5~3g/L，添加0.05~0.2%消泡劑，所述百分
比為質量體積比。
6.根據權利要求2所述的一種枯草芽孢桿菌的混菌協同發酵方法，其特征在于：所述的
三種單一菌株Bacillus?subtilis?B9601-Y2、Bacillus?subtilis?NCD-2和Bacillus?subtilis?BAB-1混
合發酵的接種配比為2~4:1~2:2~4。
7.根據權利要求3所述的一種枯草芽孢桿菌的混菌協同發酵方法，其特征在于：培養基
的滅菌條件均為0.1~0.15MPa蒸汽滅菌30~50min，滅菌溫度118~121℃。
8.根據權利要求3所述的一種枯草芽孢桿菌的混菌協同發酵方法，其特征在于：種子罐
和發酵罐混菌發酵的條件控制，培養基的裝液量為罐容積的70%~80%，所述百分比為體積體
積比，培養基滅菌后pH調節為6.0~9.0，培養溫度30~35℃、通氣量3~20L/min、罐壓80KPa、
攪拌轉速200~250r/min條件下，發酵時間為16~48h。
9.根據權利要求3所述的一種枯草芽孢桿菌的混菌協同發酵方法，其特征在：在發酵培
養基中加入微量誘導物，包括殼聚糖、甘氨酸和天冬氨酸中的一種或一種以上的復配。
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