本發明公開了一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法，收集開花第三天的花粉，用柱頭液制備含有CodA基因的農桿菌侵染液，以開花第一天的熱帶睡蓮為受體進行侵染，種子成熟后，用潮霉素篩選溶液進行種子萌發培養和篩選，抗性植株育苗后進行大田種植，露地越冬篩選抗凍植株，再以轉基因植株為父本，非轉基因熱帶睡蓮優良單株作為母本進行雜交，露地越冬篩選出耐寒優良后代。本發明為徹底解決在溫帶地區熱帶睡蓮露地自然越冬問題奠定了堅實基礎，同時也將推動熱帶睡蓮基因工程的發展。

1.一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法，其特征在于包括以下步驟：(a)農桿菌培養：將含有雙元植物表達載體pBS1305RdcodA的農桿菌EHA105單克隆接種于含50mg·L^-1卡那霉素和25mg·L^-1利福平的YM培養基上，并進行劃線培養，培養3天，用小塑料勺收集菌體；(b)花粉收集：選擇熱帶睡蓮花粉多的株系，采摘熱帶睡蓮株系上開花的花朵，所述花朵的柱頭盤中有柱頭液，將花朵插在盛有半瓶水的水瓶中，同一個株系的花朵放入一個瓶中，放置在人工氣候箱中，待第三天，將雄蕊花藥剪下，放置到已滅菌的培養皿中備用；(c)母本準備：授粉前一天，準備好第二天要開花的花蕾，并將花蕾套袋；(d)侵染：在熱帶睡蓮開花時，先用移液槍將所述柱頭液吸取到離心管中，再用小塑料勺將農桿菌輕輕刮下放入盛有柱頭液的離心管中，用毛筆采集所述培養皿中的花粉，并將花粉放入離心管中，將農桿菌、花粉和柱頭液在離心管中混合均勻，再用移液槍吸取打入柱頭盤；授粉后，在花柄上掛牌，套袋；待授粉后第三天，將袋子取下，等待種子成熟；(e)篩選：種子成熟后，用潮霉素篩選溶液進行種子萌發培養和篩選；(f)PCR鑒定：待種子發芽長沉水葉時，移栽到裝有消毒過土壤的塑料杯中，長大后，取嫩葉提取基因組DNA，進行PCR檢測，鑒定陽性植株；(g)大田種植及越冬：將陽性植株移栽到露地大田里，保持田間水位20cm以上過冬；(h)雜交及越冬篩選：以轉基因株系為父本，非轉基因熱帶睡蓮優良單株作為母本，進行雜交，收集種子、播種育苗、移栽及大田種植，露天越冬篩選抗凍優良植株；在所述步驟(e)中，所述潮霉素的濃度為10mg·L^-1。2.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法，其特征在于：在所述步驟(a)中，在進行劃線培養時，每條農桿菌劃線長度為6cm。3.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法，其特征在于：在所述步驟(a)中，所述農桿菌劃線培養在YM培養基中的溫度為28℃。4.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法，其特征在于：在所述步驟(b)中，所述人工氣候箱的溫度為25℃。5.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法，其特征在于：在所述步驟(d)中，所述侵染工作的時間控制在熱帶睡蓮開花第一天早上。6.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法，其特征在于：在所述步驟(d)中，在用移液槍將柱頭液取到離心管時，每使用一次換一個離心管。7.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法，其特征在于：在所述步驟(d)中，在用小塑料勺將農桿菌輕輕刮下放入盛有柱頭液的離心管時，每使用一次換一個小塑料勺。8.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法，其特征在于：在所述步驟(d)中，在用移液槍吸取打入柱頭盤時，每使用一次換一個槍頭。9.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法，其特征在于：在所述步驟(d)中，在農桿菌、花粉和柱頭液在離心管中混合均勻時，每毫升注頭液加2條農桿菌。