1.一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法,其特征在于包括以下步驟:(a)農桿菌培養:將含有雙元植物表達載體pBS1305RdcodA的農桿菌EHA105單克隆接種于含50mg·L-1卡那霉素和25mg·L-1利福平的YM培養基上,并進行劃線培養,培養3天,用小塑料勺收集菌體;(b)花粉收集:選擇熱帶睡蓮花粉多的株系,采摘熱帶睡蓮株系上開花的花朵,所述花朵的柱頭盤中有柱頭液,將花朵插在盛有半瓶水的水瓶中,同一個株系的花朵放入一個瓶中,放置在人工氣候箱中,待第三天,將雄蕊花藥剪下,放置到已滅菌的培養皿中備用;(c)母本準備:授粉前一天,準備好第二天要開花的花蕾,并將花蕾套袋;(d)侵染:在熱帶睡蓮開花時,先用移液槍將所述柱頭液吸取到離心管中,再用小塑料勺將農桿菌輕輕刮下放入盛有柱頭液的離心管中,用毛筆采集所述培養皿中的花粉,并將花粉放入離心管中,將農桿菌、花粉和柱頭液在離心管中混合均勻,再用移液槍吸取打入柱頭盤;授粉后,在花柄上掛牌,套袋;待授粉后第三天,將袋子取下,等待種子成熟;(e)篩選:種子成熟后,用潮霉素篩選溶液進行種子萌發培養和篩選;(f)PCR鑒定:待種子發芽長沉水葉時,移栽到裝有消毒過土壤的塑料杯中,長大后,取嫩葉提取基因組DNA,進行PCR檢測,鑒定陽性植株;(g)大田種植及越冬:將陽性植株移栽到露地大田里,保持田間水位20cm以上過冬;(h)雜交及越冬篩選:以轉基因株系為父本,非轉基因熱帶睡蓮優良單株作為母本,進行雜交,收集種子、播種育苗、移栽及大田種植,露天越冬篩選抗凍優良植株;在所述步驟(e)中,所述潮霉素的濃度為10mg·L-1。2.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法,其特征在于:在所述步驟(a)中,在進行劃線培養時,每條農桿菌劃線長度為6cm。3.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法,其特征在于:在所述步驟(a)中,所述農桿菌劃線培養在YM培養基中的溫度為28℃。4.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法,其特征在于:在所述步驟(b)中,所述人工氣候箱的溫度為25℃。5.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法,其特征在于:在所述步驟(d)中,所述侵染工作的時間控制在熱帶睡蓮開花第一天早上。6.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法,其特征在于:在所述步驟(d)中,在用移液槍將柱頭液取到離心管時,每使用一次換一個離心管。7.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法,其特征在于:在所述步驟(d)中,在用小塑料勺將農桿菌輕輕刮下放入盛有柱頭液的離心管時,每使用一次換一個小塑料勺。8.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法,其特征在于:在所述步驟(d)中,在用移液槍吸取打入柱頭盤時,每使用一次換一個槍頭。9.根據權利要求1所述的一種運用花粉管通道轉化法培育耐寒熱帶睡蓮的方法,其特征在于:在所述步驟(d)中,在農桿菌、花粉和柱頭液在離心管中混合均勻時,每毫升注頭液加2條農桿菌。
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