本發(fā)明提供了一種雜交作物轉(zhuǎn)基因安全控制的方法，其中構(gòu)建包括重組酶系統(tǒng)、轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)以及外源基因表達(dá)控制系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因植物自動(dòng)刪除雙元系統(tǒng)，通過(guò)將植物花原基細(xì)胞特異啟動(dòng)子作為所述轉(zhuǎn)基因植物自動(dòng)刪除雙元系統(tǒng)中的啟動(dòng)子控制轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)，所述轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)控制重組酶系統(tǒng)的啟動(dòng)，使導(dǎo)入到植物中的外源基因在F1代植株雜交種中以及根、莖、葉等非刪除組織中穩(wěn)定存在，但在F1代植株的花粉和種子中所述外源基因被刪除，以實(shí)現(xiàn)雜交作物轉(zhuǎn)基因安全控制。

1.一種雜交作物轉(zhuǎn)基因安全控制的方法，其中構(gòu)建包括重組酶系統(tǒng)、轉(zhuǎn)錄激
活系統(tǒng)以及外源基因表達(dá)控制系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因有性繁殖植物自動(dòng)刪除雙元系統(tǒng)，通
過(guò)將植物花原基細(xì)胞特異啟動(dòng)子作為所述轉(zhuǎn)基因有性繁殖植物自動(dòng)刪除雙元系
統(tǒng)中控制轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)的啟動(dòng)子，所述轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)控制重組酶系統(tǒng)的啟動(dòng)，使
導(dǎo)入到植物中的外源基因在F1代雜交種中以及F1代的根、莖、葉非刪除組織中
穩(wěn)定存在，但在F1代植株的花粉和種子中所述外源基因被刪除，以實(shí)現(xiàn)雜交作
物轉(zhuǎn)基因安全控制；
其中所述轉(zhuǎn)基因有性繁殖植物自動(dòng)刪除雙元系統(tǒng)包括：
第一植物表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包括兩個(gè)同向的重組酶特異識(shí)別位點(diǎn)以及
位于所述兩個(gè)重組酶特異性識(shí)別位點(diǎn)之間的下述基因或核苷酸：
控制外源基因表達(dá)的啟動(dòng)子；
用于導(dǎo)入外源基因的多克隆位點(diǎn)；
轉(zhuǎn)錄激活因子基因；以及
植物花原基細(xì)胞特異啟動(dòng)子，用于控制轉(zhuǎn)錄激活因子基因的啟動(dòng)；
第二植物表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包括兩個(gè)同向的重組酶特異識(shí)別位點(diǎn)以及
位于所述兩個(gè)重組酶特異性識(shí)別位點(diǎn)之間的下述基因或核苷酸：
控制外源基因表達(dá)的啟動(dòng)子；
用于導(dǎo)入外源基因的多克隆位點(diǎn)；
重組酶基因；以及
控制重組酶基因的靶標(biāo)啟動(dòng)子，所述靶標(biāo)啟動(dòng)子由所述轉(zhuǎn)錄激活因子基因控
制，當(dāng)被激活時(shí)，啟動(dòng)重組酶基因表達(dá)；
其中所述植物花原基細(xì)胞特異啟動(dòng)子為煙草花發(fā)育C基因ntAG的啟動(dòng)子
ntAGIP1。
2.植物花原基細(xì)胞特異啟動(dòng)子在制備安全的轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用，其中通
過(guò)將所述植物花原基細(xì)胞特異啟動(dòng)子作為轉(zhuǎn)基因有性繁殖植物自動(dòng)刪除雙元系
統(tǒng)中控制轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)的啟動(dòng)子，所述轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)控制重組酶系統(tǒng)的啟動(dòng)，
使導(dǎo)入到植物中的外源基因在雜交種以及F1代的根、莖、葉非刪除組織中穩(wěn)定
存在，但在F1代植株的花粉和種子中所述外源基因被刪除，以實(shí)現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因雜
交作物中生產(chǎn)非轉(zhuǎn)基因花粉和種子；
其中所述轉(zhuǎn)基因植物自動(dòng)刪除雙元系統(tǒng)包括：
第一植物表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包括兩個(gè)同向的重組酶特異識(shí)別位點(diǎn)以及
位于所述兩個(gè)重組酶特異性識(shí)別位點(diǎn)之間的下述基因或核苷酸：
控制外源基因表達(dá)的啟動(dòng)子；
用于導(dǎo)入外源基因的多克隆位點(diǎn)；
轉(zhuǎn)錄激活因子基因；以及
植物花原基細(xì)胞特異啟動(dòng)子，用于控制轉(zhuǎn)錄激活因子基因的啟動(dòng)；
第二植物表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包括兩個(gè)同向的重組酶特異識(shí)別位點(diǎn)以及
位于所述兩個(gè)重組酶特異性識(shí)別位點(diǎn)之間的下述基因或核苷酸：
控制外源基因表達(dá)的啟動(dòng)子；
用于導(dǎo)入外源基因的多克隆位點(diǎn)；
重組酶基因；以及
控制重組酶基因的靶標(biāo)啟動(dòng)子，所述靶標(biāo)啟動(dòng)子由所述轉(zhuǎn)錄激活因子基因控
制，當(dāng)被激活時(shí)，啟動(dòng)重組酶基因表達(dá)；
其中所述植物花原基細(xì)胞特異啟動(dòng)子為煙草花發(fā)育C基因ntAG的啟動(dòng)子
ntAGIP1。
3.一種用于雜交作物轉(zhuǎn)基因安全控制的基因自動(dòng)刪除雙元系統(tǒng)，包括
第一植物表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包括兩個(gè)同向的重組酶特異識(shí)別位點(diǎn)以及
位于所述兩個(gè)重組酶特異性識(shí)別位點(diǎn)之間的下述基因或核苷酸：
控制外源基因表達(dá)的啟動(dòng)子；
用于導(dǎo)入外源基因的多克隆位點(diǎn)；
轉(zhuǎn)錄激活因子基因；以及
植物花原基細(xì)胞特異啟動(dòng)子，用于控制轉(zhuǎn)錄激活因子基因的啟動(dòng)；
第二植物表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包括兩個(gè)同向的重組酶特異識(shí)別位點(diǎn)以及
位于所述兩個(gè)重組酶特異性識(shí)別位點(diǎn)之間的下述基因或核苷酸：
控制外源基因表達(dá)的啟動(dòng)子；
用于導(dǎo)入外源基因的多克隆位點(diǎn)；
重組酶基因；以及
控制重組酶基因的靶標(biāo)啟動(dòng)子，所述靶標(biāo)啟動(dòng)子由所述轉(zhuǎn)錄激活因子基因控
制，當(dāng)被激活時(shí)，啟動(dòng)重組酶基因表達(dá)；
其中所述植物花原基細(xì)胞特異啟動(dòng)子為煙草花發(fā)育C基因ntAG的啟動(dòng)子
ntAGIP1。
4.權(quán)利要求3所述的基因自動(dòng)刪除雙元系統(tǒng)，其中所述重組酶特異性識(shí)別
位點(diǎn)選自loxP,lox2272,lox5171和FRT識(shí)別位點(diǎn)，所述重組酶基因選自FLP、
Cre和Cre^int重組酶基因，所述靶標(biāo)啟動(dòng)子及與之配合的轉(zhuǎn)錄激活因子基因組成
的轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)為pOp/LhG4轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)。
5.一種制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，包括下述步驟：
1)構(gòu)建權(quán)利要求3所述的基因自動(dòng)刪除雙元系統(tǒng)；
2)將權(quán)利要求3所述的第一植物表達(dá)載體導(dǎo)入植物基因組，制備第一轉(zhuǎn)基
因植物；
3)將權(quán)利要求3所述的第二植物表達(dá)載體導(dǎo)入植物基因組，制備第二轉(zhuǎn)基
因植物；
4)將第一轉(zhuǎn)基因植物和第二轉(zhuǎn)基因植物作為親本相互雜交，獲得F1代轉(zhuǎn)基
因植物。