本發(fā)明屬于生化工程和酶工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用豬肝、牛肝或羊肝等動(dòng)物肝臟微粒體酶生物合成7-脫氫膽固醇的方法，包括以下步驟：(1)微粒體酶液的制備；(2)酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)；(3)皂化反應(yīng)；(4)萃取。利用本發(fā)明可以生產(chǎn)出與化學(xué)合成完全一致的7-脫氫膽固醇。并且工藝簡(jiǎn)單易行，既可以降低維生素D生產(chǎn)成本又減少環(huán)境污染。

1.一種利用動(dòng)物肝臟微粒體酶生物合成7-脫氫膽固醇的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：1.1微粒體酶液的制備將50g切成塊狀的新鮮豬肝臟放入pH?5、0.01mol/L的谷胱甘肽磷酸緩沖溶液中，在4℃條件下用組織勻漿機(jī)勻漿，兩層紗布過(guò)濾，濾液置于超聲波細(xì)胞破碎儀中，處理?xiàng)l件為：功率400W、溫度4℃、時(shí)間5min，隨后于4℃，12000r·min^-1，離心分離10min，取上清液，得到所述微粒體酶液，1.2酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)將得到的20ml所述微粒體酶液添加20ml?1μg/ml角鯊烯、2ml?2mmol/L還原型輔酶II、1ml?5mmol/L三磷酸腺苷、2ml?20mmol/L煙酰胺，反應(yīng)5h，得到一種酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)液，1.3皂化反應(yīng)將所述酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)液加入5ml?15％KOH-乙醇溶液，30℃振蕩反應(yīng)2h，得到一種皂化反應(yīng)液，1.4萃取將所述皂化反應(yīng)液用有機(jī)溶劑石油醚萃取，萃取劑與反應(yīng)液體積比為4∶1，萃取溫度30℃，萃取時(shí)間1h，萃取結(jié)束后，有機(jī)相在40℃氮?dú)饣驕p壓條件下濃縮，得到7-脫氫膽固醇。2.一種利用動(dòng)物肝臟微粒體酶生物合成7-脫氫膽固醇的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：1.1微粒體酶液的制備將50g切成塊狀的新鮮豬肝臟放入pH?6.5、0.05mol/L的谷胱甘肽磷酸緩沖溶液中，在4℃條件下用組織勻漿機(jī)勻漿，兩層紗布過(guò)濾，濾液置于超聲波細(xì)胞破碎儀中，處理?xiàng)l件為：功率150W、溫度35℃、時(shí)間40min，隨后于4℃，12000r·min^-1，離心分離10min，取上清液，得到所述微粒體酶液，1.2酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)將得到的20ml所述微粒體酶液添加20ml?40μg/ml角鯊烯、2ml?1mmol/L還原型輔酶II、1ml?2.5mmol/L三磷酸腺苷、2ml?30mmol/L煙酰胺，反應(yīng)5h，得到一種酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)液，1.3皂化反應(yīng)將所述酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)液加入5ml?15％KOH-乙醇溶液，70℃振蕩反應(yīng)1h，得到一種皂化反應(yīng)液，1.4萃取將所述皂化反應(yīng)液用有機(jī)溶劑石油醚萃取，萃取劑與反應(yīng)液體積比為6∶1，萃取溫度60℃，萃取時(shí)間4h，萃取結(jié)束后，有機(jī)相在40℃氮?dú)饣驕p壓條件下濃縮，得到7-脫氫膽固醇。3.一種利用動(dòng)物肝臟微粒體酶生物合成7-脫氫膽固醇的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：1.1微粒體酶液的制備將50g切成塊狀的新鮮羊肝臟放入pH?9、0.05mol/L的谷胱甘肽磷酸緩沖溶液中，在4℃條件下用組織勻漿機(jī)勻漿，兩層紗布過(guò)濾，濾液置于超聲波細(xì)胞破碎儀中，處理?xiàng)l件為：功率300W、溫度4℃、時(shí)間20min，隨后于4℃，12000r·min^-1，離心分離10min，取上清液，得到所述微粒體酶液，1.2酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)將得到的20ml所述微粒體酶液添加20ml?40μg/ml角鯊烯、2ml?2mmol/L還原型輔酶II、1ml?5mmol/L三磷酸腺苷、2ml?40mmol/L煙酰胺，1ml?1mmol/L?MgCL₂，反應(yīng)5h，得到一種酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)液，1.3皂化反應(yīng)將所述酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)液加入5ml?15％KOH-乙醇溶液，60℃振蕩反應(yīng)2h，得到一種皂化反應(yīng)液，1.4萃取將所述皂化反應(yīng)液用有機(jī)溶劑石油醚萃取，萃取劑與反應(yīng)液體積比為8∶1，萃取溫度40℃，萃取時(shí)間4h，萃取結(jié)束后，有機(jī)相在40℃氮?dú)饣驕p壓條件下濃縮，得到7-脫氫膽固醇。