本發(fā)明公開了一種CSN8shRNA納米脂質(zhì)體（nano-liposome）的制備方法及其在治療炎癥性腸病的應(yīng)用，通過向磷酸卵磷脂和膽固醇混合物中加入CSN8shRNA質(zhì)粒緩沖液后進(jìn)行超聲水浴、過濾、分離、富集等工藝即可制得，制備方法步驟簡單；制得的CSN8shRNA納米脂質(zhì)體能進(jìn)入腸道黏膜，有效抑制腸道細(xì)胞CSN8的表達(dá)，緩解腸炎癥狀，治療效果顯著。

1.一種CSN8shRNA納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟(1)：將磷酸卵磷脂和膽固醇溶于10倍體積的氯仿中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直
至形成具有均勻薄膜的第一混合物；
步驟(2)：向所述第一混合物中加入1/2第一混合物體積的氯仿，形成第二
混合物，再加入所述1/3第二混合物體積的CSN8shRNA質(zhì)粒緩沖液室溫攪拌
4～8小時形成第三混合物；
步驟(3)：將所述第三混合物在4～37℃條件下，30～50W功率水浴超聲處
理5～30分鐘，減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，再補(bǔ)充與步驟(2)中所加氯仿同等體
積的緩沖液，再進(jìn)行4～37℃條件下，30～50W功率水浴超聲處理5～30分鐘即得
脂質(zhì)體混懸液；
步驟(4)：將步驟(3)制得的脂質(zhì)體混懸液通過0.1μm的微孔濾膜，
20000～36000g超速離心20～60min，上層即為所需的CSN8shRNA納米脂質(zhì)體，
所述CSN8shRNA納米脂質(zhì)體的直徑小于等于100nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CSN8shRNA納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在
于，所述緩沖液為PBS、HEPES或生理鹽水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CSN8shRNA納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在
于，所述步驟(4)中將步驟(3)制得的脂質(zhì)體混懸液通過0.1μm的微孔濾膜
后，再通過0.02μm的超濾膜進(jìn)行過濾，取被截留液體，即可富集到所需的
CSN8shRNA納米脂質(zhì)體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CSN8shRNA納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在
于，所述CSN8shRNA質(zhì)粒是根據(jù)RNAi技術(shù)設(shè)計合成的針對CSN8的編碼基因
的siRNA(Small?interfering?RNA)編碼序列與表達(dá)載體連接而成的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CSN8shRNA納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在
于，所述CSN8shRNA質(zhì)粒緩沖液中CSN8shRNA質(zhì)粒的濃度為
1μg/ml～1000μg/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CSN8shRNA納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在
于，步驟(1)中磷酸卵磷脂和膽固醇的體積比為(1：1)～(10：1)。