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干擾LCYB、LCYE表達同時異位表達TT8在制備紅色花瓣蕓薹屬植物中的應用

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2022-01-21
  • 技術(shù)成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201410797228.8 
  • 技術(shù)(專利)名稱 干擾LCYB、LCYE表達同時異位表達TT8在制備紅色花瓣蕓薹屬植物中的應用 
  • 項目單位 西南大學
  • 發(fā)明人 柴友榮,劉雪,董博,廖霏霏,林吶,練劍平,王瑞,殷家明,萬華方,聞鎏法 
  • 行業(yè)類別 藥品-化學藥品
  • 技術(shù)成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 陳韻凡
  • 發(fā)布時間 2022-01-21  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明公開了干擾LCYB、LCYE表達同時異位表達TT8在制備花瓣呈紅色蕓薹屬植物中的應用,還公開了干擾LCYB、LCYE基因表達同時異位表達TT8基因的制備表達載體和載體的制備方法,通過干擾LCYB、LCYE基因表達抑制黃色類胡蘿卜素并積累紅色番茄紅素,而異位表達TT8基因能夠促進花青素苷積累,從而使花瓣呈紅色,成功制備了花瓣顯紅色的蕓薹屬植物,豐富了蕓薹屬植物的花色。
    展開
  • 02

    說明書

    1.干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環(huán)化酶基因LCYB、ε-環(huán)化酶基因LCYE表達同時異位表達
    TT8基因在制備花瓣呈紅色的蕓薹屬植物品種中的應用,其特征在于:干擾蕓薹屬植物花瓣
    中β-環(huán)化酶基因LCYB、ε-環(huán)化酶基因LCYE表達的序列如SEQ ID NO.2所示,異位表達TT8
    因的序列如SEQ ID NO.3所示。
    2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用,其特征在于:用于干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環(huán)化酶基因
    LCYB、ε-環(huán)化酶基因LCYE表達的序列由擬南芥花瓣特異啟動子PAtAP3介導表達,所述花瓣
    特異啟動子PAtAP3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1第267位至第1044位所示。
    3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項所述的應用,其特征在于:所述蕓薹屬植物為甘藍型油菜
    Brassica napus)。
    4.干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環(huán)化酶基因LCYB、ε-環(huán)化酶基因LCYE表達同時異位表達
    TT8基因的植物表達載體,其特征在于:所述植物載體包括由花瓣特異啟動子介導的表達β-
    環(huán)化酶基因LCYB、ε-環(huán)化酶基因LCYERNA干擾序列的表達框和由組成型啟動子介導異位表
    TT8基因的表達框;
    所述花瓣特異啟動子介導表達β-環(huán)化酶基因LCYB、ε-環(huán)化酶基因LCYE的RNA干擾序列
    的表達框依次由花瓣特異啟動子PAtAP3、SEQ ID NO.2所示的序列、間隔序列、SEQ ID NO.2
    所示的序列的反向互補序列和OCS終止子組成;
    所述由組成型啟動子介導異位表達TT8基因的表達框依次由CaMV35S啟動子,SEQ ID
    NO.3所示序列和NOS終止子組成;
    其制備方法如下:將SEQ ID NO.1所示序列經(jīng)AscSwa雙酶切后連入經(jīng)同樣酶切的
    pFGC5941M質(zhì)粒,得pFGC5941CEPE質(zhì)粒,然后將SEQ ID NO.2所示的序列連入pFGC5941CEPE
    載體的PAtAP3啟動子與間隔序列之間,形成中間載體pFGC5941CEPE-B2RNAia,再將SEQ ID
    NO.2所示序列反向連入中間載體pFGC5941CEPE-B2RNAia的間隔序列與OCS終止子之間,得
    pFGC5941CEPE-B2RNAi載體,最后將SEQ ID NO.3所示序列通過NcoAsc酶切位點連入經(jīng)
    同樣酶切的pFGC5941CEPE-B2RNAi載體,得干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環(huán)化酶基因LCYB、ε-環(huán)
    化酶基因LCYE表達同時異位表達TT8基因的植物表達載體。
    5.權(quán)利要求4所述植物表達載體的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:將SEQ ID
    NO.1所示序列經(jīng)AscSwa雙酶切后連入經(jīng)同樣酶切的pFGC5941M質(zhì)粒,得pFGC5941CEPE
    質(zhì)粒,然后將SEQ ID NO.2所示的序列連入pFGC5941CEPE載體的PAtAP3啟動子與間隔序列
    之間,形成中間載體pFGC5941CEPE-B2RNAia,再將SEQ ID NO.2所示序列反向連入中間載體
    pFGC5941CEPE-B2RNAia的間隔序列與OCS終止子之間,得pFGC5941CEPE-B2RNAi載體,最后
    將SEQ ID NO.3所示序列通過NcoAsc酶切位點連入經(jīng)同樣酶切的pFGC5941CEPE-
    B2RNAi載體,得干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環(huán)化酶基因LCYB、ε-環(huán)化酶基因LCYE表達同時異
    位表達TT8基因的植物表達載體。
    6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法,其特征在于:所述間隔序列為甘藍型油菜PAP2基因
    第2內(nèi)含子。
    7.利用權(quán)利要求4所述植物表達載體制備花瓣呈紅色的蕓薹屬植物品種的方法,其特
    征在于,包括如下步驟:
    a.將權(quán)利要求4所述植物表達載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌,制得工程菌;
    b.將步驟a所得工程菌轉(zhuǎn)化蕓薹屬植物無菌苗的下胚軸,共培養(yǎng)后,在Basta除草劑抗
    性下誘導分化獲得再生苗,篩選陽性苗轉(zhuǎn)基因苗得花瓣呈紅色的蕓薹屬植物品種。
    展開

專利技術(shù)附圖

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