1.干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環(huán)化酶基因
LCYB、ε-環(huán)化酶基因
LCYE表達同時異位表達
TT8基因在制備花瓣呈紅色的蕓薹屬植物品種中的應用,其特征在于:干擾蕓薹屬植物花瓣
中β-環(huán)化酶基因
LCYB、ε-環(huán)化酶基因
LCYE表達的序列如SEQ ID NO.2所示,異位表達
TT8基
因的序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用,其特征在于:用于干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環(huán)化酶基因
LCYB、ε-環(huán)化酶基因
LCYE表達的序列由擬南芥花瓣特異啟動子
PAtAP3介導表達,所述花瓣
特異啟動子
PAtAP3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1第267位至第1044位所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項所述的應用,其特征在于:所述蕓薹屬植物為甘藍型油菜
(
Brassica napus)。
4.干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環(huán)化酶基因
LCYB、ε-環(huán)化酶基因
LCYE表達同時異位表達
TT8基因的植物表達載體,其特征在于:所述植物載體包括由花瓣特異啟動子介導的表達β-
環(huán)化酶基因
LCYB、ε-環(huán)化酶基因
LCYERNA干擾序列的表達框和由組成型啟動子介導異位表
達
TT8基因的表達框;
所述花瓣特異啟動子介導表達β-環(huán)化酶基因
LCYB、ε-環(huán)化酶基因
LCYE的RNA干擾序列
的表達框依次由花瓣特異啟動子PAtAP3、SEQ ID NO.2所示的序列、間隔序列、SEQ ID NO.2
所示的序列的反向互補序列和OCS終止子組成;
所述由組成型啟動子介導異位表達
TT8基因的表達框依次由CaMV35S啟動子,SEQ ID
NO.3所示序列和NOS終止子組成;
其制備方法如下:將SEQ ID NO.1所示序列經(jīng)
Asc![]()
和
Swa![]()
雙酶切后連入經(jīng)同樣酶切的
pFGC5941M質(zhì)粒,得pFGC5941CEPE質(zhì)粒,然后將SEQ ID NO.2所示的序列連入pFGC5941CEPE
載體的PAtAP3啟動子與間隔序列之間,形成中間載體pFGC5941CEPE-B2RNAia,再將SEQ ID
NO.2所示序列反向連入中間載體pFGC5941CEPE-B2RNAia的間隔序列與OCS終止子之間,得
pFGC5941CEPE-B2RNAi載體,最后將SEQ ID NO.3所示序列通過
Nco![]()
和
Asc![]()
酶切位點連入經(jīng)
同樣酶切的pFGC5941CEPE-B2RNAi載體,得干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環(huán)化酶基因
LCYB、ε-環(huán)
化酶基因
LCYE表達同時異位表達
TT8基因的植物表達載體。
5.權(quán)利要求4所述植物表達載體的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:將SEQ ID
NO.1所示序列經(jīng)
Asc![]()
和
Swa![]()
雙酶切后連入經(jīng)同樣酶切的pFGC5941M質(zhì)粒,得pFGC5941CEPE
質(zhì)粒,然后將SEQ ID NO.2所示的序列連入pFGC5941CEPE載體的PAtAP3啟動子與間隔序列
之間,形成中間載體pFGC5941CEPE-B2RNAia,再將SEQ ID NO.2所示序列反向連入中間載體
pFGC5941CEPE-B2RNAia的間隔序列與OCS終止子之間,得pFGC5941CEPE-B2RNAi載體,最后
將SEQ ID NO.3所示序列通過
Nco![]()
和
Asc![]()
酶切位點連入經(jīng)同樣酶切的pFGC5941CEPE-
B2RNAi載體,得干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環(huán)化酶基因
LCYB、ε-環(huán)化酶基因
LCYE表達同時異
位表達
TT8基因的植物表達載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法,其特征在于:所述間隔序列為甘藍型油菜
PAP2基因
第2內(nèi)含子。
7.利用權(quán)利要求4所述植物表達載體制備花瓣呈紅色的蕓薹屬植物品種的方法,其特
征在于,包括如下步驟:
a.將權(quán)利要求4所述植物表達載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌,制得工程菌;
b.將步驟a所得工程菌轉(zhuǎn)化蕓薹屬植物無菌苗的下胚軸,共培養(yǎng)后,在Basta除草劑抗
性下誘導分化獲得再生苗,篩選陽性苗轉(zhuǎn)基因苗得花瓣呈紅色的蕓薹屬植物品種。