一種腫瘤靶向熒光探針及其在腫瘤NO檢測中的應用屬于生物技術領域，具體涉及一種可以特異性靶向到腫瘤組織的熒光探針。同時，這種熒光探針和二價銅離子形成的配合物，可應用于腫瘤中NO水平的熒光成像檢測。該熒光探針是以N-{3-(2-苯基咪唑基)-4-羥基苯基}馬來酰亞胺修飾的大腸桿菌Top10菌株。該熒光探針在哺乳動物體內能夠快速靶向到腫瘤組織中。同時，這種熒光探針和二價銅離子形成的配合物可與腫瘤組織內釋放的NO發生反應，導致熒光強度顯著增強，進而可以用于活體腫瘤組織中NO熒光檢測和活體熒光成像。

1.一種腫瘤靶向的熒光探針，其特征在于該熒光探針是N-{3-(2-苯基咪唑基)-4-羥基苯基}馬來酰亞胺修飾的大腸桿菌Top10菌株，其結構為： 2.一種測定腫瘤組織中NO的熒光探針，其特征在于該熒光探針是N-{3-(2-苯基咪唑基)-4-羥基苯基}馬來酰亞胺修飾的大腸桿菌Top10菌株與二價銅離子形成的配合物，其結構為： 3.根據權利要求1所述腫瘤靶向熒光探針的合成方法，其特征是：(1)2-(2-羥基苯基)-苯并咪唑的合成：將5～15mmol的等摩爾的水楊醛，亞硫酸氫鈉與25mL無水乙醇混合后常溫攪拌3～6h，然后將等摩爾鄰苯二胺溶解在25mL?DMF中，滴加到前面的溶液中加熱回流2～3h，反應完畢將反應物倒入10倍冷水中，析出沉淀，抽濾，干燥，無水乙醇重結晶兩次；(2)2-(2-羥基-5-硝基)-苯并咪唑的合成：將0.01～0.05g?2-(2-羥基苯基)-苯并咪唑溶于10倍量的濃硫酸中并用冰鹽浴冷卻至-10℃，逐滴加入預先制備并冷卻的由計算量的硝酸和等體積的硫酸制得的混酸，混酸為濃HNO₃1.0～5.0g，濃H₂SO₄?1.2～6.0g；并保持溫度在-10℃反應30～60min，將反應物倒入冰中，過濾沉淀，水洗至洗液為中性，然后將沉淀用1％的氨水處理，得到不溶于氨水的2-(2-羥基-5-硝基)-苯并咪唑，抽濾，得粗品，用乙醇重結晶，得純品，m.p.＞300℃；(3)2-(2-羥基-5-氨基苯基)苯并咪唑的合成：三口燒瓶中加入15mL水，0.5～1g鐵粉，攪拌下加入0.5～1.5g鹽酸，加熱至沸，在90～100℃反應3h后慢慢加入0.5～1.2g上述硝基苯并咪唑，加完后繼續保溫攪拌2h，直至無硝基物為止，再攪拌10min，冷至70℃過濾，用熱水沖洗鐵泥，最后用熱乙醇浸洗分出下面有機層，冷后結晶，冷至5℃，傾去水得粗品，收率不大于50％，粗品溶于1.2L?10％鹽酸中，脫色過濾，用40％NaOH中和至pH?8，冷至5℃以下濾出晶體，得純品，收率不大于40％；(4)N-{3-(2-苯基咪唑基)-4-羥基苯基}馬來酰亞胺酸的合成：在三口瓶內加入0.1～0.5g馬來酸酐，用5mL丙酮溶解，室溫下分批攪拌加入0.5～1g?2-(2-羥基-5-氨基苯基)苯并咪唑固體，出現黃色沉淀，加料完畢室溫攪拌反應1～3h，抽濾，丙酮洗滌，干燥，得到粗品，稀鹽酸處理，得到黃色固體粉末產物；(5)N-{3-(2-苯基咪唑基)-4-羥基苯基}馬來酰亞胺的合成：在裝有0.5～1.4gN-{3-(2-苯基咪唑基)-4-羥基苯基}馬來酰亞胺酸的三口瓶內，加入10mL甲苯，0.5mL?DMF以及0.05～0.1g對甲苯磺酸，加熱回流反應5～8h，然后加入適量DMF至固體完全溶解，繼續加熱回流反應一天，反應完畢蒸出甲苯，倒入冷水中，析出褐色沉淀，經抽濾，水洗，干燥，得到粗品，用柱層析硅膠分離，乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1作展開劑，得到純品；(6)權利要求1所述腫瘤靶向熒光探針的合成：配制LB培養基50ml，配方為每1L培養基含蛋白胨10g，酵母抽提物5g，NaCl?10g，高溫滅菌，冷卻后加Kana霉素至10mg/L，加Top10?E.coli菌液100μl，37℃勻速振蕩過夜，大腸桿菌懸液3500rpm×5min離心，棄上清，沉淀以1×PBS洗滌兩次，重新懸浮在50ml?1×PBS中，N-{3-(2-苯基咪唑基)-4-羥基苯基}馬來酰亞胺溶解于DMF中至濃度為1mM，在室溫和PBS懸浮的大腸桿菌懸液混合，低速攪拌，反應3～5小時，大腸桿菌Top10和N-{3-(2-苯基咪唑基)-4-羥基苯基}馬來酰亞胺分子的個數比為1∶10⁷～10⁸，反應后，棄上清，沉淀以1×PBS洗滌三次，仍然重新懸浮在50ml的1×PBS中，即得腫瘤靶向熒光探針。4.根據權利要求2所述測定腫瘤組織中NO的熒光探針的合成方法，其特征是以權利要求1所述的腫瘤靶向熒光探針20～40ml，加入100μM的硫酸銅溶液至苯并咪唑分子和Cu(II)的摩爾比為1∶1，苯并咪唑熒光分子數可從熒光-濃度標準曲線上讀出，在1×PBS中常溫低速攪拌，反應30min即可得。