本發明提供一種用于檢測酶活性的熒光小分子探針及其制備方法和應用，屬于生物技術領域。解決現有的檢測酶活性方法有許多是給出熒光減弱的負信號，而導致檢測的靈敏度低、穩定性差的問題。該小分子探針為3,4,9,10-四-（4-三甲基胺丁基氧-羰基）-苝，是以苝酐為原料進行烷基化反應，然后在烷基鏈的末端離子化，使其帶上正電荷得到的，該小分子探針可用于檢測酶的活性，將小分子探針和底物分子配置成混合溶液，然后再混合溶液中加入不同濃度的酶，對酶的活性進行熒光檢測，該小分子探針還可以檢測酶抑制劑的活性。本發明的檢測方法利用小分子探針可控自組裝帶來的熒光增強的信號，可實現對酶活性及酶抑制劑活性快速、靈敏的檢測。

1.一種用于檢測酶活性的小分子探針，其特征在于，該小分子探針為3,4,9,10-四-（4-三甲基胺丁基氧-羰基）-苝，其結構式為：?2.根據權利要求1所述的一種用于檢測酶活性的小分子探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：?步驟一：將苝酐溶于堿溶液中，過濾，濾液調節pH值至8～9，加入四正辛基溴化胺和1，4-二溴丁烷，在100℃～120℃回流反應1～3h，經萃取、蒸餾和純化，得到化合物3,4,9,10-四-（4-溴丁基-酯基）-苝，所述的苝酐、四正辛基溴化胺和1，4-二溴丁烷的摩爾比為1：0.1：10；?步驟二：將步驟一的得到的化合物3,4,9,10-四-（4-溴丁基-酯基）-苝溶于溶于四氫呋喃與水的混合液中，在混合溶液中加入三甲胺，在60℃～70℃回流48～96h，經蒸餾、萃取和干燥后得到3,4,9,10-四-（4-三甲基胺丁基氧-羰基）-苝，所述的3,4,9,10-四-（4-溴丁基-酯基）-苝與三甲胺的摩爾比為1：20。?3.權利要求1所述的一種用于檢測酶活性的小分子探針的應用，其特征在于，該小分子探針可用于檢測酶的活性，其檢測方法為：將小分子探針和底物分子配置成混合溶液，在混合溶液中加入不同濃度的酶，對酶的活性進行熒光檢測。?4.權利要求3所述的一種用于檢測酶活性的小分子探針的應用，其特征在于，所述的底物分子為ATP、多肽或核酸分子。?5.權利要求3所述的一種用于檢測酶活性的小分子探針的應用，其特征在于，所述的酶為磷酸酶、蛋白酶或核酸酶。?6.權利要求3所述的一種用于檢測酶活性的小分子探針的應用，其特征在于，所述的方法中，檢測反應體系為：400μL總體系，濃度為5mMpH值為8.2的Tris-HAc緩沖溶液，濃度為1-5μM小分子探針，濃度為0.2-200μM底物分子，0-5U/mL的酶，余量為無菌水。?7.權利要求3所述的一種用于檢測酶活性的小分子探針的應用，其特征在于，所述的檢測溫度為25℃。?8.權利要求3所述的一種用于檢測酶活性的小分子探針的應用，其特征在于，所述的熒光檢測條件為以442nm熒光激發，450－650nm熒光檢測。?9.權利要求1所述的一種用于檢測酶活性的小分子探針的應用，其特征在于，該小分子探針可用于檢測酶抑制劑的活性，其檢測方法為：將小分子探針和底物分子配置成混合溶液，在混合溶液中加入不同濃度的酶抑制劑，再加入酶，對酶抑制劑的活性進行熒光檢測。?10.根據權利要求9所述的一種用于檢測酶活性的小分子探針的應用，其特征在于，所述的酶抑制劑為Na₃VO₄、對甲基苯磺酰氟或焦磷酸鈉。?