本發明公開了一種細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針及其制備方法與應用。所述的具有熒光響應的DNA光點擊探針，為香豆素四唑化合物W1和W2中的至少一種；所述的W1和W2的結構式如式I和式II所示；本發明中的探針具有細胞核靶向性，反應基團體積小不干擾核酸代謝過程，并且本反應過程中具有有熒光響應，光誘導實時可控、反應速度快，特異性強、副產物少、反應條件簡單溫和及操作簡單等優點；所述的具有熒光響應的DNA光點擊探針可以應用于活細胞核酸標記領域。

1.一種細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針，其特征在于：為香豆素四唑化合物W2，其結構式如式II所示： 其中，R為甲基。2.權利要求1所述的細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針的制備方法，其特征在于包括如下步驟：(1)將香豆素衍生物加入乙醇水溶液中，接著加入濃鹽酸，然后在5℃條件下加入NaNO₂水溶液，再在-15℃的條件下滴加到4-甲基((2-(苯磺酰)亞肼基)甲基)苯甲酸鹽的吡啶中，恢復室溫進行反應，萃取、減壓蒸餾、得到W1；(2)將步驟(1)中得到的W1和氫氧化鋰在四氫呋喃、甲醇和水的混溶液中加熱攪拌反應，反應終止后再調節溶液的pH值至出現紫色沉淀，得到中間體A；(3)將步驟(2)中得到的中間體A、NHS和EDC在DMF中攪拌反應，反應終止后再加入飽和食鹽水析出沉淀，得到四唑化合物B；(4)將步驟(3)中得到的四唑化合物B加入到含有三乙胺的DCM和DMSO溶液中，然后加入牛磺酸水溶液攪拌反應，減壓蒸餾，加甲醇稀釋沉淀過濾后，調pH值至中性，再加入乙醚、過濾、取沉淀，得到W2，即為細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針；步驟(1)中所述的香豆素衍生物的結構式如下所示： 3.根據權利要求2所述的細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的香豆素衍生物和4-甲基((2-(苯磺酰)亞肼基)甲基)苯甲酸鹽按摩爾比為10:9配比計算；步驟(2)中所述的香豆素四唑化合物和氫氧化鋰按摩爾比為1:20配比計算；步驟(3)中所述的中間體A、NHS和EDC按摩爾比為1:2:2配比計算；步驟(4)所述的四唑化合物B、三乙胺和牛磺酸按摩爾比為1:2：2配比計算。4.根據權利要求2所述的細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的乙醇水溶液為乙醇和水按體積比1:1配比得到；步驟(1)中所述的乙醇水溶液的用量為按乙醇水溶液和濃鹽酸的體積比6:1配比計算；步驟(2)中所述的四氫呋喃的用量為按四氫呋喃、甲醇和水體積比2:1:1配比計算；步驟(4)中所述的DCM的用量為按DCM和DMSO體積比4～6:1配比計算。5.根據權利要求2所述的細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的萃取為采用DCM進行萃取；步驟(3)中所述的反應的時間為12h；步驟(4)中所述的調pH值為用氫氧化鈉的甲醇溶液進行調pH值；步驟(4)中所述的反應為在氮氣保護下進行反應。6.權利要求1所述的細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針在核酸標記領域中的應用。7.根據權利要求6所述的細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針在核酸標記領域中的應用，其特征在于通過如下方法實現：(I)將細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針與具有氨基的核酸序列在硼酸鈉緩沖液中避光孵育進行縮合反應，用預冷的無水乙醇將核酸沉降出來，得到香豆素四唑修飾的核酸；(II)將步驟(I)得到的香豆素四唑修飾的核酸分別與異丙基丙烯酰胺和N-(2-羥乙基)馬來酰亞胺在磷酸鹽緩沖液中、紫外光照射下發生光點擊反應，得到具有熒光響應的核酸。8.根據權利要求6所述的細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針在核酸標記領域中的應用，其特征在于通過如下方法實現：①將細胞傳代到培養皿中培養貼壁后，加入5-乙烯基-2’-脫氧尿苷進行培養；②換成新的DMEM培養液孵育后，再加入細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針繼續培養；③加入新的DMEM培養液孵育后，再用紫外光照射進行反應。9.根據權利要求8所述的細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針在核酸標記領域中的應用，其特征在于：步驟①中所述的細胞為腫瘤細胞；步驟①中所述的加入5-乙烯基-2’-脫氧尿苷為加入終濃度為30～50μM的5-乙烯基-2’-脫氧尿苷；步驟①中所述的培養的時間為12～20小時；步驟②中所述的加入細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針為加入終濃度為10～20μM的細胞內熒光響應標記DNA的光點擊探針；步驟②中所述的孵育的時間為3～6小時；步驟②中所述的繼續培養的時間為3～6小時；步驟③中所述的孵育的時間為2小時；步驟③中所述的紫外光波長為350nm；步驟③中所述的紫外光的照射時間為8～14分鐘。