本發明公開了一種檢測過氧亞硝酸根的雙光子熒光探針及其制備方法與應用，其結構式為：將該雙光子熒光探針命名為TPNIR?FP，該雙光子熒光探針以尼羅紅衍生物為熒光團，以α?酮酰胺官能團作為ONOO反應基團，與ONOO能快速響應(<10s)，且靈敏度高、選擇性好。能應用于蒽環類抗生素誘導的心肌細胞和心肌組織損傷中ONOO的成像研究中。

1.一種檢測過氧亞硝酸根的雙光子熒光探針，其特征在于：其結構式為： 。2.權利要求1所述雙光子熒光探針的制備方法，其特征在于：反應方程式為： 包括如下步驟：1)將化合物TPNIR-NH2溶于惰性溶劑中，并向其中加入三乙胺，攪拌均勻后，得混合液；2)將化合物1的二氯甲烷溶液逐滴滴加到步驟1)的混合液中，反應設定時間后，即得。3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟1)中，所述惰性溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃或二氧六環。4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：化合物TPNIR-NH2、化合物1和三乙胺的物質的量之比為1:2-10:2-5。5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟2)中還包括將反應產物溶液進行旋干、提純的步驟。6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于：步驟2)中，采用硅膠柱層析對反應產物進行提純。7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于：所述硅膠柱層析的洗脫劑為二氯甲烷和甲醇的混合液，二氯甲烷和甲醇的體積比為150-250:1。8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于：所述硅膠柱層析的洗脫劑為二氯甲烷和甲醇的混合液，二氯甲烷和甲醇的體積比為200:1。