本發(fā)明公開了一種利用特異性探針底物測(cè)定細(xì)胞色素P450 2A6酶活的方法。具體的CYP 2A6酶活性測(cè)定的方法如下：選擇異戊烯基酚類化合物單體，如異甘草香豆素、異甘草酚、7?O?Methylluteone，作為細(xì)胞色素P450 2A6酶的高特異性探針底物，借助CYP體外孵育體系開展特異性底物的CYP催化反應(yīng)，通過(guò)定量檢測(cè)單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物生成量或底物消耗量來(lái)測(cè)定各生物樣品中CYP 2A6酶的活性，以期實(shí)現(xiàn)對(duì)重要藥物代謝酶CYP 2A6酶活力的評(píng)估。

1.一種利用特異性探針底物測(cè)定細(xì)胞色素P450 2A6酶活的方法，其特征在于：該特異
性探針底物是具有異戊烯基的酚類化合物，其結(jié)構(gòu)式見式(1)-(3)；

采用上述式(1)-(3)化合物之一作為底物，該類底物在P4502A6酶的催化下僅選擇性生
成單羥基化產(chǎn)物，通過(guò)檢測(cè)底物減少或產(chǎn)物生成量來(lái)測(cè)定生物樣本中P450 2A6酶的活性。
2.按照權(quán)利要求1所述利用特異性探針底物測(cè)定細(xì)胞色素P450 2A6酶活性的方法，其
特征在于：
(1)用異戊烯基酚類化合物單體中的一種作為特異性探針底物，底物的濃度范圍為
0.1-200μM，有機(jī)溶劑總量須低于1v/v％；
(2)在100mM磷酸鉀的pH＝7.0-8.0緩沖液體系中加入0.2-0.6mg/mL人肝微粒體、1-
10mM NADP、1-8mM G-6-P、1-3unit/mL G-6-P-DE和1-10mM氯化鎂的NADPH系統(tǒng)，反應(yīng)溫度為
30-40℃，200μL孵化體系；
(3)體系中加入NADPH生成系統(tǒng)反應(yīng)開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)30-120min，確保底物生成相應(yīng)的單
羥基化產(chǎn)物達(dá)到檢測(cè)儀器的定量限，加入800-1200μL 4℃冷乙腈終止反應(yīng)；
(4)含有甲醇的PBS作空白對(duì)照，測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)底物減少量或單羥基化產(chǎn)物生成量作
為細(xì)胞色素P450 2A6酶活性的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。
3.按照權(quán)利要求1所述利用特異性探針底物測(cè)定細(xì)胞色素P450 2A6酶活的方法，其特
征在于，生物樣本為重組細(xì)胞色素P450亞酶、人及動(dòng)物的肝微粒體、組織中的細(xì)胞色素P450
2A6酶的任意一種。