本發(fā)明公開了一種實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)貉子源性成分的引物、探針及具體檢測(cè)方法，具有良好的靈敏性和特異性，采用實(shí)時(shí)熒光PCR特異擴(kuò)增法可以定性分析畜肉食品中是否含有貉子源性成分,發(fā)揮了實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn),進(jìn)一步完善了食品檢測(cè)體系,加大對(duì)消費(fèi)者利益的保護(hù)力度。

1.實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)貉子源性成分的引物探針，分別為：上游引物Pl：CTATACCTGGCATCTGGTTCTTACC；下游引物P2：GTCCCATTTGAGTGGATTAGTAGGA；帶有熒光染料的探針序列為:?CAGGGCCATGAACTCCCTCCATCC。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)貉子源性成分的引物探針，其特征在于：所述的熒光染料，5′端為FAM標(biāo)記，3′端eclipse標(biāo)記。3.實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)貉子源性成分的方法，其步驟如下：a.提取待檢樣品基因組DNA；b.以所提取的DNA作為模板,加入權(quán)利要求1所述的引物探針以及酶反應(yīng)液進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)，記錄樣品反應(yīng)的Ct值。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)貉子源性成分的方法，其特征在于：所述的實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系為：2×Real-time?PCR預(yù)混液?10μL，10?μmol/L上游引物1μL，10?μmol/L下游引物???1μL，10?μmol/L??探針??????1μL，1～100?ng/μL樣品DNA??2μL，ddH₂O??????????????????5μL。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)貉子源性成分的方法，其特征在于：所述的實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)條件為95℃10min,1個(gè)循環(huán)；95℃，15s，60℃30s,40個(gè)循環(huán)。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)貉子源性成分的方法，其特征在于：所述的實(shí)時(shí)熒光PCR方法還設(shè)有空白對(duì)照、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照，判定標(biāo)準(zhǔn)為:空白對(duì)照:以ddH₂O為模板,按照權(quán)利要求4所述的實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系和權(quán)利要求5所述的實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)條件,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng),檢測(cè)Ct值大于或等于40;陰性對(duì)照:以非貉子源性物種基因組DNA為模板,按照權(quán)利要求4所述的實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系和權(quán)利要求5所述的實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)條件,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng),檢測(cè)Ct值大于或等于40;陽(yáng)性對(duì)照:以貉子基因組DNA為模板,按照權(quán)利要求4所述的實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系和權(quán)利要求5所述的實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)條件,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng),檢測(cè)Ct值小于或等于34;待測(cè)樣品貉子源性基因檢測(cè)Ct值大于或等于40，陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常者,判定該樣品未檢出貉子源性基因;待測(cè)樣品貉子源性基因檢測(cè)Ct值小于或等于36，陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常者,判定該樣品檢出貉子源性基因;待測(cè)樣品貉子源性基因檢測(cè)Ct值在36-40之間，重做實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增，再次擴(kuò)增后結(jié)果Ct值大于40，且陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常,判定該樣品未檢出貉子源性基因;再次擴(kuò)增后結(jié)果Ct值仍小于40，且陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常,判定該樣品檢出貉子源性基因。