永久免费黄色大片-乱老胖熟妇60XXXXXX-亚洲成人手机AV-久久鬼色-三级片视频网站在线观看-韩日成人午夜

您現在的位置: 首頁 > 技術轉讓 > 十面體納米銀探針在利用表面等離子共振成像技術篩選核酸適配體中的應用

十面體納米銀探針在利用表面等離子共振成像技術篩選核酸適配體中的應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-01
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710023541.X 
  • 技術(專利)名稱 十面體納米銀探針在利用表面等離子共振成像技術篩選核酸適配體中的應用 
  • 項目單位 南京大學
  • 發明人 許丹科,賈文超,李慧 
  • 行業類別 醫藥制造-藥用輔料
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 鄭詠萱
  • 發布時間 2021-09-01  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了十面體納米銀探針在利用表面等離子共振成像技術篩選核酸適配體中的應用,所述的十面體納米銀探針為:以50~60nm的十面體納米銀為內核,納米銀的外表面有兩條核苷酸鏈,A鏈為文庫反向引物互補鏈,所述文庫反向引物互補鏈鍵合在納米銀的外表面;B鏈為核酸文庫序列,所述核酸文庫序列與文庫反向引物互補鏈互補配對結合;其中,所述文庫反向引物互補鏈為的結構如下:3’端為文庫反向引物互補序列,中間為10個A堿基作為間隔臂,5’端為巰基修飾。本發明提供的十面體納米銀可以負載核酸文庫,能提適配體篩選過程中信號靈敏度,進而提高適配體的篩選效率。
    展開
  • 02

    說明書

    1.十面體納米銀探針在利用表面等離子共振成像技術篩選核酸適配體中的應用;所述的十面體納米銀探針為:以50~60nm的十面體納米銀為內核,納米銀的外表面有兩條核苷酸鏈,A鏈為文庫反向引物互補鏈,所述文庫反向引物互補鏈鍵合在納米銀的外表面;B鏈為核酸文庫序列,所述核酸文庫序列與文庫反向引物互補鏈互補配對結合;其中,所述文庫反向引物互補鏈的結構如下:3’端為文庫反向引物互補序列,中間為10~18個A堿基作為間隔臂,5’端為巰基修飾;所述的十面體納米銀探針的制備方法如下:(1)十面體納米銀的合成:將檸檬酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、L-精氨酸、硝酸銀按照摩爾比為(0.1~70):(0.1~10):(0.2~30):(0.2~30)加入到100~300ml去離子水中,然后加入0.1~1M硼氫化鈉水溶液,使硼氫化鈉與硝酸銀的摩爾比為(1~100):1,在藍光燈照射下反應16~72h,得到十面體納米銀溶液;(2)十面體納米銀的修飾:取步驟(1)得到的十面體納米銀溶液,加入文庫反向引物互補鏈、氯化鈉,其中,納米銀、文庫反向引物互補鏈、氯化鈉的摩爾比為(0.1~10pmol):(0.1~10nmol):(10~200μmol),滴吐溫-20,吐溫-20與納米銀溶液的體積比為(0.001~0.01):1,混勻,37℃震蕩1~5h;(3)將步驟(2)得到的混合體系靜置10~24小時;(4)離心步驟(3)得到的溶液,取沉淀加入1×PBS緩沖液重懸,重復離心與重懸的步驟2~4次,1×PBS緩沖溶液每次加入體積為沉淀體積0.1~5倍;最后離心得到的沉淀使用1×PBS緩沖溶液重懸;(5)向步驟(4)得到的混合體系中加入核酸文庫溶液,使核酸文庫與修飾有反向引物互補鏈的十面體納米銀的摩爾比(100~2000):1,震蕩反應10~60min,得到十面體納米銀探針。2.用于篩選乳鐵蛋白核酸適配體的十面體納米銀探針,其特征在于,它是以50~60nm的十面體納米銀為內核,納米銀的外表面有兩條核苷酸鏈,A鏈為文庫反向引物互補鏈,所述文庫反向引物互補鏈鍵合在納米銀的外表面;B鏈為核酸文庫序列,所述核酸文庫序列與文庫反向引物互補鏈互補配對結合;其中,所述文庫反向引物互補鏈為:5’- SH -(CH2)6-AAAAAAAAAAGAAGAGGAGGGAGGT-3’;所述核酸文庫序列為:5’-GACAGGCAGGACACCGTAAC-N40-CTGCTACCTCCCTCCTCTTC-3’,其中N40表示40個隨機堿基。3.權利要求2所述的十面體納米銀探針的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:(1a)十面體納米銀的合成:將檸檬酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、L-精氨酸、硝酸銀按照摩爾比為(0.1~70):(0.1~10):(0.2~30):(0.2~30)加入到100~300ml去離子水中,然后加入0.1~1M硼氫化鈉水溶液,使硼氫化鈉與硝酸銀的摩爾比為(1~100):1,在藍光燈照射下反應16~72h,得到十面體納米銀溶液;(2a)十面體納米銀的修飾:取步驟(1a)得到的十面體納米銀溶液,加入文庫反向引物互補鏈、氯化鈉,其中,納米銀、文庫反向引物互補鏈、氯化鈉的摩爾比為(0.1~10pmol):(0.1~10nmol):(10~200μmol),滴吐溫-20,吐溫-20與納米銀溶液的體積比為(0.001~0.01):1,混勻,37℃震蕩1~5h;所述文庫反向引物互補鏈為:5’- SH -(CH2)6-AAAAAAAAAAGAAGAGGAGGGAGGT-3’;(3a)將步驟(2a)得到的混合體系靜置10~24小時;(4a)離心步驟(3a)得到的溶液,取沉淀加入1×PBS緩沖液重懸,重復離心與重懸的步驟2~4次,1×PBS緩沖溶液每次加入體積為沉淀體積0.1~5倍;最后離心得到的沉淀使用1×PBS緩沖溶液重懸;(5a)向步驟(4a)得到的混合體系中加入核酸文庫溶液,使核酸文庫與修飾有反向引物互補鏈的十面體納米銀的摩爾比(100~2000):1,震蕩反應10~60min,得到十面體納米銀探針;所述核酸文庫序列為:5’-GACAGGCAGGACACCGTAAC-N40-CTGCTACCTCCCTCCTCTTC-3’,其中N40表示40個隨機堿基。4.權利要求2所述十面體納米銀探針在篩選乳鐵蛋白核酸適配體中的應用。5.根據權利要求4所述的應用,其特征在于,利用十面體納米銀探針篩選核酸適配體的步驟如下:(1b)SPRI傳感芯片表面巰基烷基酸自主裝:將金膜厚度為48 nm的金片浸泡在濃度為1 mM的11-巰基烷基酸的乙醇溶液中過夜反應;使用大量的乙醇和超純水沖洗芯片表面,最后N2吹干備用;(2b)配制溶液:正篩蛋白溶液:乳鐵蛋白溶于1×PBS緩沖溶液中,其中乳鐵蛋白的濃度為250μg/mL;負篩蛋白溶液:BSA、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和酪蛋白分別溶于10mM醋酸鈉溶液中,pH4.5,其中BSA、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白的濃度均分別為160μg/mL;篩選緩沖液:將 1×PBS中加入MgCl2?6H2O固體,形成1×PBSM作為篩選緩沖液;芯片活化試劑: 0.8 M EDC水溶液、0.2 M NHS水溶液;封閉試劑: 1M 乙醇胺溶液;(3b)蛋白的固定:移取200 μL,0.8 M EDC與200 μL,0.2 M NHS混合,形成400 μL濃度為0.4 M EDC、0.1M NHS混合溶液,使用10 μL/min流速在芯片表面進行活化反應40 min;然后分別在兩個通道內以10 μL/min流速分別反應正篩蛋白與負篩蛋白40min;最后將200 μL,1M乙醇胺以20μL/min的流速封閉10 min;再使用1×PBS緩沖液平衡芯片30 min;(4b)待基線平穩后,將正篩通道與負篩通道進行串聯;六通閥接入至負篩通道入口,使用恒流注射泵以20 μL/min的流速對篩選緩沖液進行傳輸,使用六通閥對200 μL十面體納米銀負載文庫進樣,同時對正篩通道與負篩通道進行信號采集并存儲,反應時間為40 min;(5b)將正篩通道與負篩通道分離,使用篩選緩沖液清洗正篩通道15 min,然后使用90μL,50 mM NaOH溶液以流速10~50 μL/min沖洗正篩通道,并對洗脫樣品進行收集,再加入37.5 μL 濃度為 120 mM 鹽酸溶液進行中和;(6b) PCR擴增與ssDNA提純:PCR擴增:將收集并中和后的產物進行7~9輪預擴增,再將溶液分為40份進行擴增9輪,得到產物后,將40份溶液進行合并;磁珠清洗:使用0.1 mg/mL的BSA溶液對粒徑為3 μm的鏈霉親和素標記的磁珠(SA-MB)清洗兩次,再除去上層清液;ssDNA提純并測序,即得到乳鐵蛋白核酸適配體。
    展開

專利技術附圖

服務流程

過戶資料

  • 買賣雙方需提供資料
  • 平臺提供
  • 過戶后您將獲得
  • 買家
  • 賣家
  • 公司
  • 企業營業執照
  • 企業營業執照

    專利注冊證原件

  • 個人
  • 身份證

    個體戶營業執照

  • 身份證

    專利注冊證原件

  • 專利代理委托書

    轉讓申請書

    轉讓協議

  • 手續合格通知書

    專利證書

    專利利登記簿副本

安全保障

  • 品類齊全

    海量資源庫,平臺整合幾十萬閑置資源。
  • 交易保障

    完善的資金保障體系確保買賣雙方資金安全。
  • 專人跟進

    專業交易顧問全程服跟進,確保交易流暢。
  • 快速響應

    專業在線/電話客服服務,快速響應貼心服務。
  • 售后無憂

    資質過硬,國內大知識產權服務平臺。
  • -我要咨詢-
  • ×
聯系人:
專利名稱: *
聯系電話: *
驗證碼:

提交

關于我們 | 聯系我們

傳真:0435-3213171 電話:18801213919 郵箱:lizhiwen@bayuegua.com 地址:吉林省通化市東昌區新華大街1003號(通化市科技成果轉化中心)


舉報電話:0435-5112631     舉報郵箱:chenwenbo@bayuegua.com

備案號ICP備18003140號-1
主站蜘蛛池模板: 亚洲AV网 | 91蜜桃麻豆媒体成人影院 | 亚洲高清成人 | 91玉足| 亚洲av网址 | 午夜精品久久久久久久久无码99热 | 在线无码网站 | 久久99精品久久久久久噜噜 | 无码人妻精品一区二区在线 | 久久久久成人精品免费播放动漫 | 一区二区在线视频 | av成人网址 | 性久久久久久 | 亚洲欧美日韩综合第一页 | 精品人妻无码一区二区出白浆潮喷 | 精品人妻在线 | 无码少妇精品一区二区150p | caoporen | 波多野结衣无码av | 国产人妻人伦精品熟女 | 182午夜成人福利AV在线观看 | 免费看无码网站成人A片 | 色吊丝中文字幕 | 国产白嫩精品久久久久久草莓 | 91精品91| 草逼片| 亚洲一级av | 福利视频免费看 | 中文字幕日本有码 | 成人AV一区 | 91在线无码精品秘 在线观看 | 国模啪啪一区二区三区 | 日本另类αv欧美另类aⅴ | 亚洲最新av网站 | 精品久久久久久久免费人妻三轩 | 久久激情成人影院 | 99精品99| www.俺去也.com | 亚洲午夜福利视频 | 韩国三级无码无遮床戏视频 | 牛牛电影国产一区二区 |