1.十面體納米銀探針在利用表面等離子共振成像技術篩選核酸適配體中的應用;所述的十面體納米銀探針為:以50~60nm的十面體納米銀為內核,納米銀的外表面有兩條核苷酸鏈,A鏈為文庫反向引物互補鏈,所述文庫反向引物互補鏈鍵合在納米銀的外表面;B鏈為核酸文庫序列,所述核酸文庫序列與文庫反向引物互補鏈互補配對結合;其中,所述文庫反向引物互補鏈的結構如下:3’端為文庫反向引物互補序列,中間為10~18個A堿基作為間隔臂,5’端為巰基修飾;所述的十面體納米銀探針的制備方法如下:(1)十面體納米銀的合成:將檸檬酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、L-精氨酸、硝酸銀按照摩爾比為(0.1~70):(0.1~10):(0.2~30):(0.2~30)加入到100~300ml去離子水中,然后加入0.1~1M硼氫化鈉水溶液,使硼氫化鈉與硝酸銀的摩爾比為(1~100):1,在藍光燈照射下反應16~72h,得到十面體納米銀溶液;(2)十面體納米銀的修飾:取步驟(1)得到的十面體納米銀溶液,加入文庫反向引物互補鏈、氯化鈉,其中,納米銀、文庫反向引物互補鏈、氯化鈉的摩爾比為(0.1~10pmol):(0.1~10nmol):(10~200μmol),滴吐溫-20,吐溫-20與納米銀溶液的體積比為(0.001~0.01):1,混勻,37℃震蕩1~5h;(3)將步驟(2)得到的混合體系靜置10~24小時;(4)離心步驟(3)得到的溶液,取沉淀加入1×PBS緩沖液重懸,重復離心與重懸的步驟2~4次,1×PBS緩沖溶液每次加入體積為沉淀體積0.1~5倍;最后離心得到的沉淀使用1×PBS緩沖溶液重懸;(5)向步驟(4)得到的混合體系中加入核酸文庫溶液,使核酸文庫與修飾有反向引物互補鏈的十面體納米銀的摩爾比(100~2000):1,震蕩反應10~60min,得到十面體納米銀探針。2.用于篩選乳鐵蛋白核酸適配體的十面體納米銀探針,其特征在于,它是以50~60nm的十面體納米銀為內核,納米銀的外表面有兩條核苷酸鏈,A鏈為文庫反向引物互補鏈,所述文庫反向引物互補鏈鍵合在納米銀的外表面;B鏈為核酸文庫序列,所述核酸文庫序列與文庫反向引物互補鏈互補配對結合;其中,所述文庫反向引物互補鏈為:5’- SH -(CH2)6-AAAAAAAAAAGAAGAGGAGGGAGGT-3’;所述核酸文庫序列為:5’-GACAGGCAGGACACCGTAAC-N40-CTGCTACCTCCCTCCTCTTC-3’,其中N40表示40個隨機堿基。3.權利要求2所述的十面體納米銀探針的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:(1a)十面體納米銀的合成:將檸檬酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、L-精氨酸、硝酸銀按照摩爾比為(0.1~70):(0.1~10):(0.2~30):(0.2~30)加入到100~300ml去離子水中,然后加入0.1~1M硼氫化鈉水溶液,使硼氫化鈉與硝酸銀的摩爾比為(1~100):1,在藍光燈照射下反應16~72h,得到十面體納米銀溶液;(2a)十面體納米銀的修飾:取步驟(1a)得到的十面體納米銀溶液,加入文庫反向引物互補鏈、氯化鈉,其中,納米銀、文庫反向引物互補鏈、氯化鈉的摩爾比為(0.1~10pmol):(0.1~10nmol):(10~200μmol),滴吐溫-20,吐溫-20與納米銀溶液的體積比為(0.001~0.01):1,混勻,37℃震蕩1~5h;所述文庫反向引物互補鏈為:5’- SH -(CH2)6-AAAAAAAAAAGAAGAGGAGGGAGGT-3’;(3a)將步驟(2a)得到的混合體系靜置10~24小時;(4a)離心步驟(3a)得到的溶液,取沉淀加入1×PBS緩沖液重懸,重復離心與重懸的步驟2~4次,1×PBS緩沖溶液每次加入體積為沉淀體積0.1~5倍;最后離心得到的沉淀使用1×PBS緩沖溶液重懸;(5a)向步驟(4a)得到的混合體系中加入核酸文庫溶液,使核酸文庫與修飾有反向引物互補鏈的十面體納米銀的摩爾比(100~2000):1,震蕩反應10~60min,得到十面體納米銀探針;所述核酸文庫序列為:5’-GACAGGCAGGACACCGTAAC-N40-CTGCTACCTCCCTCCTCTTC-3’,其中N40表示40個隨機堿基。4.權利要求2所述十面體納米銀探針在篩選乳鐵蛋白核酸適配體中的應用。5.根據權利要求4所述的應用,其特征在于,利用十面體納米銀探針篩選核酸適配體的步驟如下:(1b)SPRI傳感芯片表面巰基烷基酸自主裝:將金膜厚度為48 nm的金片浸泡在濃度為1 mM的11-巰基烷基酸的乙醇溶液中過夜反應;使用大量的乙醇和超純水沖洗芯片表面,最后N2吹干備用;(2b)配制溶液:正篩蛋白溶液:乳鐵蛋白溶于1×PBS緩沖溶液中,其中乳鐵蛋白的濃度為250μg/mL;負篩蛋白溶液:BSA、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和酪蛋白分別溶于10mM醋酸鈉溶液中,pH4.5,其中BSA、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白的濃度均分別為160μg/mL;篩選緩沖液:將 1×PBS中加入MgCl2?6H2O固體,形成1×PBSM作為篩選緩沖液;芯片活化試劑: 0.8 M EDC水溶液、0.2 M NHS水溶液;封閉試劑: 1M 乙醇胺溶液;(3b)蛋白的固定:移取200 μL,0.8 M EDC與200 μL,0.2 M NHS混合,形成400 μL濃度為0.4 M EDC、0.1M NHS混合溶液,使用10 μL/min流速在芯片表面進行活化反應40 min;然后分別在兩個通道內以10 μL/min流速分別反應正篩蛋白與負篩蛋白40min;最后將200 μL,1M乙醇胺以20μL/min的流速封閉10 min;再使用1×PBS緩沖液平衡芯片30 min;(4b)待基線平穩后,將正篩通道與負篩通道進行串聯;六通閥接入至負篩通道入口,使用恒流注射泵以20 μL/min的流速對篩選緩沖液進行傳輸,使用六通閥對200 μL十面體納米銀負載文庫進樣,同時對正篩通道與負篩通道進行信號采集并存儲,反應時間為40 min;(5b)將正篩通道與負篩通道分離,使用篩選緩沖液清洗正篩通道15 min,然后使用90μL,50 mM NaOH溶液以流速10~50 μL/min沖洗正篩通道,并對洗脫樣品進行收集,再加入37.5 μL 濃度為 120 mM 鹽酸溶液進行中和;(6b) PCR擴增與ssDNA提純:PCR擴增:將收集并中和后的產物進行7~9輪預擴增,再將溶液分為40份進行擴增9輪,得到產物后,將40份溶液進行合并;磁珠清洗:使用0.1 mg/mL的BSA溶液對粒徑為3 μm的鏈霉親和素標記的磁珠(SA-MB)清洗兩次,再除去上層清液;ssDNA提純并測序,即得到乳鐵蛋白核酸適配體。
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