本發明屬于生物技術領域，涉及基因的定量分析方法，具體是指轉基因玉米98140結構特異定量PCR精準檢測方法。本發明采用設計的特異性上游引物序列、下游引物序列、熒光探針序列、98140品系的DNA稀釋液以及Taqman？Master？mix（2×）和水配制成PCR反應體系，進行定量PCR檢測。本發明主要建立了一種高擴增效率、高準確度的Taqman定量PCR檢測技術，適用于國內農業轉基因生物及產品監督檢驗、進出境口岸轉基因生物及產品檢驗、企業內部進口原材料含轉基因98140構建結構的生物成分檢測。

1.轉基因玉米98140結構特異性定量PCR精準檢測的引物和探針，其特征在于,
用于檢測pinⅡ終止子與zm-hragene相連位置的引物和探針如下：
上游引物序列，zm-F：5'-TGGCCAATCCAGAAGATGGA-3'；
下游引物序列，zm-R：5'-TGGTGATGGCAGGACTGTGT-3'；
熒光探針序列，zm-P：5'-FAM-AAGTCTAGGTTAACTGACTAGC-TAMRA-3'；
用于檢測Gate4621gene與pinⅡ終止子相接處的引物和探針如下：
上游引物序列，gat-F：5'-TTGGGATTCAGTGAGCAAGGA-3'；
下游引物序列，gat-R：5'-CCAATCCAGAAGATGGACAAGTCT-3'；
熒光探針序列，gat-P：5'-FAM-AGGTGTTCGATACTCCTCCAGTTGGACCTC-TAMRA-3'。
2.轉基因玉米98140結構特異性定量PCR精準檢測方法，其特征在于,包括以下步驟：
檢測pinⅡ終止子與zm-hragene相連位置：
（a1）合成以下引物及與引物配合使用的熒光探針，
上游引物序列，zm-F：5'-TGGCCAATCCAGAAGATGGA-3'
下游引物序列，zm-R：5'-TGGTGATGGCAGGACTGTGT-3'
熒光探針序列，zm-P：5'-FAM-AAGTCTAGGTTAACTGACTAGC-TAMRA-3'；
（a2）制備98140品系的DNA稀釋液；
（a3）配制PCR反應體系；
（a4）定量PCR檢測。
3.根據權利要求2所述的轉基因玉米98140結構特異性定量PCR精準檢測方法，其特征
在于，檢測Gate4621gene與pinⅡ終止子相接處：
（b1）合成以下引物及與引物配合使用的熒光探針，
上游引物序列，gat-F：5'-TTGGGATTCAGTGAGCAAGGA-3'
下游引物序列，gat-R：5'-CCAATCCAGAAGATGGACAAGTCT-3'
熒光探針序列，gat-P：5'-FAM-AGGTGTTCGATACTCCTCCAGTTGGACCTC-TAMRA-3'；
（b2）制備98140品系的DNA稀釋液；
（b3）配制PCR反應體系；
（b4）定量PCR檢測。
4.根據權利要求3所述的轉基因玉米98140結構特異性定量PCR精準檢測方法，其特征
在于，步驟（a1）和（b1）中合成的引物及熒光探針的濃度均為10μmol/L，步驟（a2）和（b2）中
制備的DNA稀釋液的濃度為50ng/μL。
5.根據權利要求4所述的轉基因玉米98140結構特異定量PCR精準檢測方法，其特征在
于，步驟（a3）和（b3）中所述的配制PCR反應體系，即將DNA稀釋液加入到反應體系中，所述反
應體系是由以下組分組成：
2×TaqmanMastermix10μl
上游引物1μl
下游引物1μl
熒光探針0.5μl
DNA稀釋液3.0μl
50ROX0.4μl
水4.1μl。
6.根據權利要求3或5所述的轉基因玉米98140結構特異性定量PCR精準檢測方法，其特
征在于，所述PCR反應條件為：95℃預變性10min，1個循環；95℃變性15s，57℃退火60s，45個
循環。