本發(fā)明涉及一種7-磷酸景天庚酮糖的制備方法，在70℃下，固定化耐熱轉(zhuǎn)酮酶，以5-磷酸木酮糖和5-磷酸核糖為原料通過酶促反應(yīng)制備7-磷酸景天庚酮糖。本發(fā)明涉及的酶能夠耐受70℃高溫，在此條件下酶的反應(yīng)體系不易染菌；并且在此條件下目標(biāo)產(chǎn)物7-磷酸景天庚酮糖得率高。在此溫度條件下，固定化酶層析柱中殘留的大腸桿菌其它的酶失活，最大程度地減少其它酶的干擾，更容易得到并純化目標(biāo)產(chǎn)物。

1.一種7-磷酸景天庚酮糖的制備方法，其特征在于，在70℃下，
固定化耐熱轉(zhuǎn)酮酶，以5-磷酸木酮糖和5-磷酸核糖為原料通過酶促
反應(yīng)制備7-磷酸景天庚酮糖；所述耐熱轉(zhuǎn)酮酶來源于耐熱解纖維梭菌
（Clostridium?cellulolyticum），其氨基酸序列為如SEQ?ID?NO.2所示
的氨基酸序列，所述固定化耐熱轉(zhuǎn)酮酶的方法是采用重組工程菌表達(dá)
C-端帶有6個組氨酸標(biāo)簽的耐熱轉(zhuǎn)酮酶（6×His-TK），然后使用
Ni-NTA蛋白純化樹脂層析柱特異性吸附6×His-TK，洗去雜蛋白，
Ni-NTA蛋白純化樹脂層析柱保留TK，在有底物5-磷酸木酮糖和5-
磷酸核糖情況下，生成7-磷酸景天庚酮糖，其中，利用多聚酶鏈反應(yīng)
擴(kuò)增耐熱解纖維梭菌的轉(zhuǎn)酮酶（TK）基因，然后把該基因片段插入
到表達(dá)載體pET中，構(gòu)建表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，并表達(dá)TK，
其中，用于擴(kuò)增TK基因的正向引物和反向引物如SEQ?ID?NO.3和
SEQ?ID?NO.4所示；所述耐熱轉(zhuǎn)酮酶在70℃下有最大的酶活，表達(dá)產(chǎn)
物為C-端帶有6個組氨酸標(biāo)簽的耐熱解纖維梭菌轉(zhuǎn)酮酶。