1.一種以生物胺為特征標(biāo)志物鑒別蜂毒種類的方法,其特征在于,包括如下步驟:
(1)配制標(biāo)準(zhǔn)工作液:取適量生物胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶于純水中,配制成1ng/mL~1000ng/mL
不同濃度梯度的多個標(biāo)準(zhǔn)工作液;
所述生物胺為組織胺、多巴胺、五羥色胺、腎上腺素、去甲腎上腺素;
(2)制備待測樣品溶液:取適量待測蜂毒樣品溶于水中,渦旋處理后取上清液即得;
(3)采用HPLC/MS/MS方法檢測待測樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)工作液:采用單點校準(zhǔn)或多點校準(zhǔn)
法對蜂毒中的生物胺進(jìn)行定性分析和定量分析;
所述HPLC條件為:采用PFP色譜柱;
流動相:A相:0.1%的甲酸水,B相:甲醇溶液;梯度洗脫條件如下:
所述MS/MS的檢測參數(shù)為:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,按如下方式配制標(biāo)準(zhǔn)工作液:取等量生物
胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)同時溶于純水中,配制混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述多個標(biāo)準(zhǔn)工作液為3-10個。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述多個標(biāo)準(zhǔn)工作液為7個。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度梯度分別為1ng/
mL,5ng/mL,10ng/mL,50ng/mL,100ng/mL,500ng/mL,1000ng/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-2、4-5任一項所述的方法,其特征在于,所述待測樣品溶液采用如下
方法制備:每5.0mg樣品加入1-3mL純水,渦旋5-15min,離心后取上清液備用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,所述待測樣品溶液采用如下方法制備:每
5.0mg樣品加入2mL純水,渦旋10min,1000rpm離心后取上清液備用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-2、4-5、7任一項所述的方法,其特征在于:所述HPLC還包括如下檢測
條件:柱溫:25~35℃;流速:0.2~0.5mL/min;進(jìn)樣量:4.0-6.0μL;
和/或,所述MS/MS還包括如下檢測條件:霧化器溫度:300~400℃;霧化器流速:5-8L/
min;霧化器壓力:30~40psi;毛細(xì)管電壓:1800~2200V;鞘流氣溫度:320~380℃;鞘流氣
流速:8~10L/min;錐孔電壓:800~1200V。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于:所述HPLC還包括如下檢測條件:柱溫30℃,
流速0.3mL/min,進(jìn)樣量5.0μL;
和/或,所述MS/MS還包括如下檢測條件:霧化器溫度:350℃;霧化器流速:6L/min;霧化
器壓力:35psi;毛細(xì)管電壓:2000V;鞘流氣溫度:350℃;鞘流氣流速:9L/min;錐孔電壓:
1000V。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-2、4、5、7、9任一項所述的方法,其特征在于:所述蜂毒為意大利蜜
蜂蜂毒、王漿高產(chǎn)蜜蜂蜂毒、安納托利亞蜜蜂蜂毒、高加索蜜蜂蜂毒、卡尼鄂拉蜜蜂蜂毒、喀
爾巴阡蜜蜂蜂毒中的一種或多種。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于:所述蜂毒為意大利蜜蜂蜂毒、王漿高產(chǎn)蜜
蜂蜂毒、安納托利亞蜜蜂蜂毒、高加索蜜蜂蜂毒、卡尼鄂拉蜜蜂蜂毒、喀爾巴阡蜜蜂蜂毒中
的一種或多種。