本發(fā)明公開了一種利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法，包括步驟：標(biāo)準(zhǔn)品制備，液相色譜分離，質(zhì)譜檢測并制標(biāo)準(zhǔn)曲線，血漿中兒茶酚胺的檢測。本發(fā)明的方法創(chuàng)新性地應(yīng)用高通量液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀進(jìn)行兒茶酚胺的檢測，具有以下有益效果：采用乙腈進(jìn)行蛋白沉淀，丹磺酰氯進(jìn)行衍生化反應(yīng)，提取后使用液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀檢測，前處理步驟簡單，可以有效去除血漿基質(zhì)干擾，特異性好；通過丹磺酰氯衍生化后，能有效提高檢測靈敏度；高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測，同時定性并精準(zhǔn)定量血漿中包括多巴胺，腎上腺素，去甲腎上腺素的3種兒茶酚胺，檢測時間短，通量高，檢測靈敏度高，特異性好，成本低廉。

1.一種利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法，其特征在于，包括如下步
驟：
1)標(biāo)準(zhǔn)品制備：分別取若干不同濃度的兒茶酚胺乙腈溶液，分別加入等量的含已知濃
度內(nèi)標(biāo)的乙腈溶液，備用；
在避光條件下，利用衍生化試劑丹磺酰氯對加入內(nèi)標(biāo)的兒茶酚胺乙腈溶液，進(jìn)行衍生
化處理使得兒茶酚胺發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，以提高兒茶酚胺在質(zhì)譜上的信號響應(yīng)；衍生化試劑丹
磺酰氯具體為：4mg/mL的丹磺酰氯乙腈溶液和0.1M pH＝11.0的Na₂CO₃–NaHCO₃緩沖溶液按
體積比為3:1的混合溶液，衍生化反應(yīng)條件為：35℃避光反應(yīng)30min；
反應(yīng)完后加入甲酸水溶液調(diào)節(jié)使pH＝7，離心后取樣品上清液于96孔板上備用，用于液
相色譜串聯(lián)質(zhì)譜上樣分析，完成標(biāo)準(zhǔn)品的制備；
2)液相色譜分離：利用超高壓液相色譜以及相應(yīng)的流動相，在反向C18分析柱上對標(biāo)準(zhǔn)
品中兒茶酚胺進(jìn)行色譜洗脫分離，通過控制洗脫條件，分離出腎上腺素、去甲腎上腺素和多
巴胺；液相色譜條件為：色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18Column:pore size
particle size 1.7μm,2.1mm×50mm；cat.#186002350IVD；色譜柱柱溫：25℃；進(jìn)樣量：15μ
l；流速：0.3ml/min；流動相組成：A相：20mM醋酸銨和0.1％甲酸水溶液，體積分?jǐn)?shù)，B相：
0.1％甲酸-乙腈溶液，體積分?jǐn)?shù)；
3)質(zhì)譜檢測并制標(biāo)準(zhǔn)曲線：液相色譜上分離出的3種兒茶酚胺進(jìn)入到三重四級桿質(zhì)譜
進(jìn)行檢測，利用三重四級桿質(zhì)譜中的多重反應(yīng)監(jiān)控模式特異性地檢測3種兒茶酚胺的含量，
根據(jù)信號噪音比計算得到定量檢測限與鑒定檢測限，根據(jù)比值以及已知標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)濃度
值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖并得到定量校正方程；
4)血漿中兒茶酚胺的檢測：取血漿樣本，加入含已知濃度內(nèi)標(biāo)的乙腈溶液進(jìn)行蛋白沉
淀，充分沉淀后第一次離心，移取血漿上清液并進(jìn)行冷凍干燥；
在避光條件下，利用衍生化試劑丹磺酰氯對血漿上清液進(jìn)行衍生化處理使得兒茶酚胺
發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，以提高兒茶酚胺在質(zhì)譜上的信號響應(yīng)；衍生化試劑丹磺酰氯具體為：4mg/mL
的丹磺酰氯乙腈溶液和0.1M pH＝11.0的Na₂CO₃–NaHCO₃緩沖溶液按體積比為3:1的混合溶
液，衍生化反應(yīng)條件為：35℃避光反應(yīng)30min；
反應(yīng)完后加入甲酸水溶液調(diào)節(jié)使pH＝7，第二次離心后取樣品上清液于96孔板上備用，
用于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜上樣分析；
液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析同步驟2)和3)，質(zhì)譜檢測得到兒茶酚胺與內(nèi)標(biāo)的比值，將比值
代入到定量校正方程，計算得到血漿中兒茶酚胺的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法，其
特征在于，所述步驟1)中內(nèi)標(biāo)為氘代香草扁桃酸，所述含已知濃度內(nèi)標(biāo)的乙腈溶液的濃度
為25nmol/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法，其
特征在于，所述步驟1)中若干不同濃度的兒茶酚胺乙腈溶液的濃度均控制在1pmol/L～1μ
mol/L之間。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法，其
特征在于，所述步驟1)和4)中甲酸水溶液為體積分?jǐn)?shù)15％的甲酸水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法，其
特征在于，所述步驟1)中離心的條件為溫度4℃，離心力18000g，時間5min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法，其
特征在于，所述步驟4)中血漿與含內(nèi)標(biāo)乙腈溶液的體積比為1:3，第一次離心的條件為溫度
4℃，離心力18000g，時間10min；第二次離心的條件為溫度4℃，離心力18000g，時間5min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法，其
特征在于，所述步驟3)中，質(zhì)譜條件為：質(zhì)譜為Waters Xevo TQD IVD：Waters,Milford,MA；
質(zhì)譜檢測條件如下：電噴霧針電壓：3.2kV，去溶劑氣流速：800L/h，去溶劑氣溫度：400℃，錐
孔氣流速：50L/h，檢測為陽離子模式，多重反應(yīng)監(jiān)控，檢測駐留時間為25ms。