本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種釀酒酵母菌株高產(chǎn)乳酸乙酯的新途徑及其應(yīng)用。通過(guò)將乳酸脫氫酶、丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶與醇酰基轉(zhuǎn)移酶同時(shí)在釀酒酵母中異源表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)乳酸乙酯。在出發(fā)菌株中完全敲除丙酮酸脫羧酶，過(guò)表達(dá)乳酸脫氫酶，以獲得一定L?乳酸產(chǎn)生能力的酵母菌株；選用強(qiáng)啟動(dòng)子TEF1過(guò)表達(dá)丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶及強(qiáng)啟動(dòng)子PGK1過(guò)表達(dá)醇酰基轉(zhuǎn)移酶，以同宗配合的基因HO作為整合位點(diǎn)，增加一個(gè)丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶的拷貝數(shù)，獲得乳酸乙酯顯著提高的酵母菌株，其乳酸乙酯的產(chǎn)量達(dá)353.1mg/L，與出發(fā)菌株相比，異戊醇降低49.9％，苯乙醇降低59.2％，滿足白酒相關(guān)領(lǐng)域?qū)湍傅妮^高要求，具有廣闊的應(yīng)用前景。

1.一種釀酒酵母高產(chǎn)乳酸乙酯的方法，其特征在于，通過(guò)將乳酸脫氫酶基因ldh、丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶基因Pct與醇酰基轉(zhuǎn)移酶基因AAT同時(shí)在釀酒酵母中異源表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)；所述乳酸脫氫酶基因?yàn)閬?lái)自植物乳桿菌的乳酸脫氫酶基因ldhL1，其Gene ID為：1061886，核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQ ID NO:1所示；所述乳酸脫氫酶ldh基因的異源表達(dá)是通過(guò)替換釀酒酵母丙酮酸脫羧酶基因PDC1實(shí)現(xiàn)的。2.一株高產(chǎn)乳酸乙酯的釀酒酵母基因工程菌株，其特征在于，以釀酒酵母為出發(fā)菌株，通過(guò)過(guò)表達(dá)乳酸脫氫酶基因ldh，同時(shí)異源表達(dá)丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶基因Pct和醇酰基轉(zhuǎn)移酶基因AAT獲得，所述丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶基因Pct為單拷貝表達(dá)或雙拷貝表達(dá)；所述乳酸脫氫酶基因?yàn)閬?lái)自植物乳桿菌的乳酸脫氫酶基因ldhL1，其Gene ID為：1061886，核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQ ID NO:1所示；所述乳酸脫氫酶ldh基因的異源表達(dá)是通過(guò)替換釀酒酵母丙酮酸脫羧酶基因PDC1實(shí)現(xiàn)的。3.如權(quán)利要求2所述的一株高產(chǎn)乳酸乙酯的釀酒酵母基因工程菌株，其特征在于，所述所述丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶基因Pct為來(lái)自丙酸梭菌的丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶基因PctCp、真氧產(chǎn)堿桿菌H16的丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶基因PctRe或來(lái)自埃氏巨型球菌的丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶基因PctMe；其中，PctCp基因?qū)?yīng)丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶的Protein_ID為CAB77207.1；PctRe的Gene ID:4250134；PctMe基因?qū)?yīng)丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶的Protein_ID為BAU59368.1。4.如權(quán)利要求2所述的一株高產(chǎn)乳酸乙酯的釀酒酵母基因工程菌株，其特征在于，所述所述丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶基因Pct為來(lái)自熱醋穆?tīng)柺暇谋］o酶A轉(zhuǎn)移酶基因PctMt，其GeneID為3833054，核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQ ID NO:2所示。5.如權(quán)利要求2所述的一株高產(chǎn)乳酸乙酯的釀酒酵母基因工程菌株，其特征在于，所述醇酰基轉(zhuǎn)移酶基因AAT為來(lái)自釀酒酵母的ATF1、EHT1或EEB1基因、草莓的SAAT基因、香瓜的Mel2基因或獼猴桃的AeAT9基因；其中，ATF1基因的Gene ID為：854559；EHT1基因的Gene ID為：852476；EEB1基因的GeneID為：856010；SAAT基因?qū)?yīng)醇酰基轉(zhuǎn)移酶的Protein ID為AAG13130.1；Mel2基因?qū)?yīng)醇酰基轉(zhuǎn)移酶的Protein ID為Z70521.1；AeAT9基因?qū)?yīng)醇酰基轉(zhuǎn)移酶的Protein ID為AIC83789.1。6.如權(quán)利要求2所述的一株高產(chǎn)乳酸乙酯的釀酒酵母基因工程菌株，其特征在于，所述所述醇酰基轉(zhuǎn)移酶基因AAT為來(lái)自草莓的醇酰基轉(zhuǎn)移酶基因VAAT，核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQ ID NO:3所示。7.如權(quán)利要求2所述的一株高產(chǎn)乳酸乙酯的釀酒酵母基因工程菌株，其特征在于，所述出發(fā)酵母菌株為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC32315。8.如權(quán)利要求2所述的一株高產(chǎn)乳酸乙酯的釀酒酵母基因工程菌株，其特征在于，其特征在于，構(gòu)建步驟如下：(1)產(chǎn)乳酸釀酒酵母菌株的構(gòu)建以釀酒酵母為出發(fā)菌株，異源過(guò)表達(dá)乳酸脫氫酶基因ldh；所述乳酸脫氫酶ldh基因的異源表達(dá)是通過(guò)替換釀酒酵母丙酮酸脫羧酶基因PDC1實(shí)現(xiàn)的；(2)兩步酶法產(chǎn)乳酸乙酯釀酒酵母菌株的構(gòu)建用強(qiáng)啟動(dòng)子TEF1_P和PGK1_P分別對(duì)丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶基因Pct和醇酰基轉(zhuǎn)移酶基因AAT在上述產(chǎn)乳酸酵母菌株中進(jìn)行強(qiáng)表達(dá)；所述丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶基因Pct與醇酰基轉(zhuǎn)移酶基因AAT的異源過(guò)表達(dá)是通過(guò)替換轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Gal80基因?qū)崿F(xiàn)的；丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶基因Pct進(jìn)行二次拷貝表達(dá)時(shí)的整合位點(diǎn)為HO基因。9.權(quán)利要求2所述高產(chǎn)乳酸乙酯釀酒酵母菌株在釀酒過(guò)程中高產(chǎn)乳酸乙酯中的應(yīng)用。