一種基于胰蛋白酶催化的N端穩定同位素編碼的氨基酸標記的相對定量蛋白質組學方法。蛋白質在水相緩沖溶液中經過胰蛋白酶酶解凍干后，轉移到含微量水的乙醇體系中，又在胰蛋白酶的催化下將穩定同位素編碼的精氨酸連接到這些肽段的N末端。該酶促標記溫和的反應條件以及高度區域專一性大大減少了肽段降解和副反應的發生。由于新的肽鍵也能在串聯質譜中解離，所以新形成的其他碎片離子能大大提高的肽鑒定的準確度。通過應用于標準蛋白質以及復雜的蛋白質組學樣品的標記，證明這種定量方法的可靠性和準確度。

1.一種酶催化的N端標記的定量蛋白質組學方法，其特征在于：利用胰蛋白酶的催化作
用，將輕重穩定同位素標記的氨基酸標簽分別連接到胰蛋白酶酶解后的肽段的N端，經液質
聯用分析后，進行蛋白質組學相對定量研究。
2.根據權利要求1所述的酶催化的N端標記的定量蛋白質組學方法，其特征在于：所述
胰蛋白酶的催化作用為固定化的胰蛋白酶的催化作用。
3.根據權利要求1所述的酶催化的N端標記的定量蛋白質組學方法，其特征在于：所用
的輕重穩定同位素標記的氨基酸標簽分別為¹²C₆-L-arginine和¹³C₆-L-arginine的衍生物
Bz-R-OEt和Bz-(¹³C₆)R-OEt，化學式如下，

4.根據權利要求1所述的酶催化的N端標記的定量蛋白質組學方法，其特征在于：胰蛋
白酶的酶促催化的反應體系是含有4％(v/v)0.1MpH8.0Tris-HCl緩沖溶液的乙醇溶液。
5.根據權利要求1-4任一所述的酶催化的N端標記的定量蛋白質組學方法，其特征在
于：按如下步驟進行，終濃度32-64mM的輕重穩定同位素標簽Bz-Arg-OEt和Bz-(¹³C₆)Arg-
OEt分別和100-200μg胰蛋白酶酶解肽段溶解分散在50-100μl含有4％(v/v)0.1MpH
8.0Tris-HCl緩沖溶液的乙醇溶液中，然后加入1-2mg的含有50-100μg胰蛋白酶的磁性納米
材料固定化的胰蛋白酶，接著將此混合物在30℃下振蕩孵育8-10小時，通過磁力除去固定
化胰蛋白酶后，將輕重不同標記的肽段按質量比1:1混合然后凍干，將1μg凍干后的肽段復
溶在20μl0.1％(v/v)甲酸中進行RPLC-MS/MS分析，最后使用一個以肽為中心的數據庫
Peptide-Centricdatabase進行搜索得到定量結果。
6.根據權利要求1所述的酶催化的N端標記的定量蛋白質組學方法，其特征在于：獲取
的相對定量結果可以用于蛋白質組差異分析或肽段的從頭測序分析。
7.根據權利要求1所述的酶催化的N端標記的定量蛋白質組學方法，其特征在于：
所述胰蛋白酶酶解后的肽段是指蛋白質在含有1-2M尿素和50-100mMpH8.0的Tris-
HCl的水相緩沖溶液中經過胰蛋白酶酶解后的產物。