本發(fā)明包括用于在胰腺中通過超聲靶向破壞微泡，從而再生葡萄糖反應(yīng)細(xì)胞的組合物和方法，其中所述組合物包含與微泡在內(nèi)部和附近接觸的預(yù)裝配的脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物，其中所述預(yù)裝配的脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物包含在啟動子控制下的NeuroD基因，其中在胰腺的靶位點(diǎn)微泡的破壞將核酸遞送到位于超聲破壞位置的胰腺細(xì)胞中，其中摻入核酸的細(xì)胞對高血糖水平作出反應(yīng)表達(dá)胰島素。

1.一種用于在胰腺中超聲靶向破壞微泡的組合物，所述組合物包含：
預(yù)裝配的脂質(zhì)體-核酸微泡復(fù)合物，
其中所述預(yù)裝配的脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物包含核酸，所述的核酸包含在大
鼠或人胰島素啟動子的控制下的GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因的
組合，其中在胰腺的靶位點(diǎn)微泡的破壞將核酸遞送到位于超聲破壞位置的
胰腺細(xì)胞中，其中摻入核酸的細(xì)胞對高血糖水平作出反應(yīng)表達(dá)胰島素，
其中所述的胰島素啟動子由該胰島素啟動子的基因組片段組成，該基
因組片段由5’非翻譯區(qū)和外顯子1，和/或內(nèi)含子1和外顯子2組成。
2.權(quán)利要求1所述的組合物，所述組合物還包含一個或多個基因，所
述基因選自ngn3、PDX1、Mafa、β細(xì)胞素、Nkx2.2、Nkx6.1、PAX4、Isl1
和Neuro?D。
3.權(quán)利要求1所述的組合物，所述組合物還包含與所述組合物聯(lián)合給
藥的藥物，其中，所述藥物選自抗細(xì)胞凋亡劑、抗炎劑、GLP-1、阿那白
滯素或它們的組合。
4.權(quán)利要求1所述的組合物，所述組合物還包含與所述組合物聯(lián)合給
藥的藥物，其中，所述藥物選自JNK抑制劑、他克莫司、西羅莫司或它們
的組合。
5.一種用于在胰腺中利用超聲靶向破壞微泡再生胰腺β細(xì)胞的組合
物，所述組合物包含：
微泡，所述微泡包含GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因的組合，
其中，所述微泡包含脂質(zhì)，所述脂質(zhì)在胰腺中通過超聲破壞釋放GLP1、
CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因，其中所述的GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋
白D2基因包含在RIP4.1或者RIP3.1啟動子控制下的GLP1、CDK4和細(xì)
胞周期蛋白D2基因，并且所述的GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因
在已通過超聲靶向破壞微泡進(jìn)行靶向表達(dá)的細(xì)胞中表達(dá)。
6.一種組合物在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途，所述的治療通
過在糖尿病患者的體內(nèi)和原位再生胰島素反應(yīng)細(xì)胞來進(jìn)行：
所述的組合物包含有效量的GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因的
組合和超聲靶向的微泡，其中所述的GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基
因包含在RIP4.1或者RIP3.1啟動子控制下的GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋
白D2基因，并且所述的GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因能夠在已
通過超聲靶向破壞微泡進(jìn)行靶向表達(dá)的細(xì)胞中表達(dá)，其中該細(xì)胞對血液中
的高葡萄糖水平作出反應(yīng)分泌胰島素。
7.權(quán)利要求6所述的用途，其中，所述有效量的GLP1、CDK4和細(xì)
胞周期蛋白D2基因包含表達(dá)GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因的外
源核酸片段。
8.一種使得靶細(xì)胞變得對胰島素反應(yīng)的方法，該方法用于非治療的目
的，所述方法包括：
制備核酸片段，所述核酸片段包含在胰島素反應(yīng)啟動子的控制下的
GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因的組合，所述胰島素反應(yīng)啟動子選
自RIP4.1或RIP3.1啟動子；
將該核酸片段載入微泡中；
向患者注射微泡；
將核酸片段遞送到胰腺細(xì)胞中；和
將靶細(xì)胞保持在對于表達(dá)所述的胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因有效的條件下；
其中，在靶細(xì)胞中GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因的表達(dá)引起細(xì)胞
對高血糖作出反應(yīng)。
9.權(quán)利要求8所述的方法，所述核酸片段還包含在所述的啟動子的控
制下的PDX1。
10.權(quán)利要求8所述的方法，所述方法還包括將藥物與所述組合物聯(lián)
合給藥，其中，所述藥物選自抗細(xì)胞凋亡劑、抗炎劑、GLP-1、阿那白滯
素或它們的組合。
11.權(quán)利要求8所述的方法，所述方法還包括將藥物與所述組合物聯(lián)
合給藥，其中，所述藥物選自JNK抑制劑、他克莫司、西羅莫司或它們的
組合。
12.權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述微泡包含預(yù)裝配的脂質(zhì)體-
核酸復(fù)合物脂質(zhì)體。
13.權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述微泡包含預(yù)裝配的脂質(zhì)體-
核酸復(fù)合物脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物脂質(zhì)體包含與質(zhì)粒混合的1,2-
二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰膽堿和1,2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-磷脂
酰乙醇胺甘油。
14.可操作地連接到大鼠或人胰島素啟動子區(qū)域的胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基
因在制備用于治療糖尿病患者的藥物中的用途，所述的治療通過恢復(fù)胰島
素反應(yīng)性來進(jìn)行，其中所述的治療包括以下步驟：
獲得分離的核酸片段，所述核酸片段包含與胰島素啟動子區(qū)可操作地
連接的所述的胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因，所述胰島素啟動子區(qū)由胰島素啟動子
的基因組片段組成，所述胰島素啟動子的基因組片段由胰島素基因的5’
非翻譯區(qū)、外顯子1、內(nèi)含子1和外顯子2組成；
將核酸片段轉(zhuǎn)移到靶細(xì)胞中；和
將靶細(xì)胞保持在對于表達(dá)胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因有效的條件下；其中，
在靶細(xì)胞中胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因的表達(dá)引起細(xì)胞對高血糖作出反應(yīng)，其中
所述的可操作地連接到胰島素啟動子區(qū)域的胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因包含
GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因的組合。
15.權(quán)利要求14所述的用途，其中，所述胰島素反應(yīng)細(xì)胞在動物中。
16.權(quán)利要求14所述的用途，其中，與胰島素啟動子區(qū)可操作地連接
的所述胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因在病毒載體或質(zhì)粒載體中。
17.權(quán)利要求14所述的用途，其中，與胰島素啟動子區(qū)可操作地連接
的胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因還包含ngn3、PDX1、Mafa、β細(xì)胞素、Nkx2.2、
Nkx6.1、PAX4、Isl1和Neuro?D。
18.權(quán)利要求14所述的用途，其中所述的靶細(xì)胞是胰腺細(xì)胞。
19.權(quán)利要求14所述的用途，其中，所述胰島素啟動子區(qū)包含在轉(zhuǎn)錄
起始位點(diǎn)上游的區(qū)域中SEQ?ID?NO.:1的100到500個連續(xù)堿基。
20.權(quán)利要求14所述的用途，其中，所述胰島素啟動子區(qū)包含SEQ?ID?
NO.:1中轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游的整個區(qū)域。
21.權(quán)利要求14所述的用途，其中，所述胰島素啟動子區(qū)包含SEQ?ID?
NO.:2中轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游的整個區(qū)域。
22.一種用于在胰腺中超聲靶向破壞微泡的組合物，所述組合物包含：
與微泡接觸的預(yù)裝配的脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物，其中，所述預(yù)裝配的脂質(zhì)
體-核酸復(fù)合物包含與高表達(dá)、可調(diào)節(jié)的大鼠或人胰島素啟動子區(qū)可操作地
連接的胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因，所述胰島素啟動子區(qū)由胰島素啟動子的基因
組片段組成，所述胰島素啟動子的基因組片段由胰島素基因的5’非翻譯
區(qū)、外顯子1、內(nèi)含子1和外顯子2組成，其中在胰腺中靶位點(diǎn)處采用超
聲波破壞微泡，將核酸遞送到位于超聲破壞位置的胰腺細(xì)胞中，其中所述
的可操作地連接到大鼠或人胰島素啟動子區(qū)域的胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因包
含GLP1、CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因的組合。
23.權(quán)利要求22的組合物，其中，所述預(yù)裝配的脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物
包含陽離子脂質(zhì)、陰離子脂質(zhì)或者它們的混合物和組合。
24.權(quán)利要求22的組合物，其中，所述微泡置于藥學(xué)上可接受的載體
中。
25.權(quán)利要求22的組合物，其還包含胰島素基因。
26.權(quán)利要求22的組合物，其還包含在啟動子控制下的己糖激酶基
因。
27.權(quán)利要求22的組合物，其中，所述預(yù)裝配的脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物
脂質(zhì)體包含與質(zhì)粒混合的1,2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰膽堿和1,2-
二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺甘油。
28.權(quán)利要求22的組合物，其中，所述組合物還包含覆蓋層。
29.權(quán)利要求22的組合物，其中，所述組合物還包含與胰島素啟動子
區(qū)可操作地連接的一個或多個胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因，所述一個或多個胰島
素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因選自ngn3、PDX1、Mafa、β細(xì)胞素、Nkx2.2、Nkx6.1、
PAX4、Isl1和Neuro?D。
30.通過以下方法成為胰島素反應(yīng)性的細(xì)胞，所述方法包括：
將該細(xì)胞與預(yù)裝配的脂質(zhì)體-核酸微泡復(fù)合物接觸，其中所述預(yù)裝配的
脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物包含在大鼠或人胰島素啟動子的控制下的GLP1、
CDK4和細(xì)胞周期蛋白D2基因的組合，所述胰島素啟動子由胰島素啟動
子的基因組片段組成，所述胰島素啟動子的基因組片段由胰島素基因的5’
非翻譯區(qū)、外顯子1、內(nèi)含子1和外顯子2組成，其中微泡的破壞將核酸
遞送至所述的細(xì)胞中，其中該細(xì)胞對高血糖水平作出反應(yīng)表達(dá)胰島素。
31.權(quán)利要求30的細(xì)胞，所述細(xì)胞還包含與胰島素啟動子區(qū)可操作地
連接的一個或多個胰島素反應(yīng)調(diào)節(jié)基因，所述的一個或多個胰島素反應(yīng)調(diào)
節(jié)基因選自ngn3、PDX1、Mafa、β細(xì)胞素、Nkx2.2、Nkx6.1、PAX4、Isl1
和Neuro?D；和針對細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑的siRNA、INK4家族
的成員，或CIP/KIP家族的成員。
32.權(quán)利要求31的細(xì)胞，其中所述INK4家族的成員是p16。
33.權(quán)利要求31的細(xì)胞，其中所述CIP/KIP家族的成員是p27。