1.一種人尿氫化可的松的檢測方法,其特征在于,所述方法包括:
(1)、向人的尿液中加入含有尿氫化可的松內(nèi)標(biāo)物的甲醇溶液,充分混
勻后離心,提取上層清液,得待測樣品;
其中,所述人的尿液與所述甲醇溶液的體積比是1:1;所述上層清液與
對應(yīng)的原溶液的體積比為1:2;
(2)、對所述待測樣品用液相色譜串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測;
其中,所述檢測方法采用負(fù)離子模式,掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測離子掃描
MRM;
其中,目標(biāo)定量離子對包括氫化可的松定量離子對,目標(biāo)定量離子的多
反應(yīng)監(jiān)測離子掃描MRM的條件包括:
氫化可的松的母離子的質(zhì)/荷比為407.2,對應(yīng)的子離子的質(zhì)/荷比為
331.1;
其中,所述液相色譜采用梯度模式洗脫,液相色譜條件包括:
色譜柱:PFP3.5μm2.0×50mm;
柱溫:55℃;
進(jìn)樣量:20μ1;
流速:0.7m1/min;
流動相:含0.1%甲酸和0.2mmo1/L乙酸銨的水,以及,含0.1%甲酸和
0.2mmo1/L乙酸銨的乙腈;
氫化可的松的保留時間為4.18min;
(3)、依據(jù)氫化可的松的相對保留時間和氫化可的松定量離子對的豐度
比判斷氫化可的松的存在;
依據(jù)氫化可的松與對應(yīng)內(nèi)標(biāo)物在內(nèi)標(biāo)曲線上的峰面積比值,計算樣品中
的氫化可的松的含量;
其中,所述梯度洗脫的時間和相應(yīng)比例包括:0min,10%A,90%B;
0.5min,10%A,90%B;0.6min,15%A,85%B;3.0min,15%A,85%B;
5.0min,32%A,68%B;5.1min,80%A,20%B;5.6min,80%A,20%B;
5.7min,10%A,90%B;7min,停止;其中,A相為含0.1%甲酸和0.2mmol/L
乙酸銨的水,B相為含0.1%甲酸和0.2mmol/L乙酸銨的乙腈。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述內(nèi)標(biāo)物包括
4d-氫化
可的松。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述
4d-氫化可的松的保
留時間為4.19min;
內(nèi)標(biāo)定量離子對包括
4d-氫化可的松定量離子對,內(nèi)標(biāo)定量離子對的多
反應(yīng)監(jiān)測離子掃描MRM的條件包括:
4d-氫化可的松定量離子對的母離子的質(zhì)/荷比為411.2,對應(yīng)的子離子的
質(zhì)/荷比為335.1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述待測樣品包括干擾物,
所述干擾物包括皮質(zhì)酮,和/或,強的松龍;
其中,所述皮質(zhì)酮的保留時間為3.90min;所述強的松龍的保留時間為
4.33min;
干擾物定量離子對包括皮質(zhì)酮定量離子對,和/或,強的松龍定量離子
對;干擾物定量離子對的多反應(yīng)監(jiān)測離子掃描MRM的條件包括:
皮質(zhì)酮定量離子對的母離子的質(zhì)/荷比為359.4,對應(yīng)的子離子的質(zhì)/荷比
為329.2;
強的松龍定量離子對的母離子的質(zhì)/荷比為359.4,對應(yīng)的子離子的質(zhì)/
荷比為329.2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或4所述的方法,其特征在于,所述多反應(yīng)監(jiān)
測離子掃描MRM的條件還包括:
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6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述質(zhì)譜離子源參數(shù)包
括:
電離源:電噴霧電離ESI源;
氣簾氣CUR:45psi;
加熱氣Gs1:45psi:
輔助加熱氣Gs2:55psi:
加熱氣溫度:500℃;
碰撞氣:高純氮氣,4psi;
電噴霧針電壓:-4500V。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述離心的條件包括:以
6000r/min的速度離心5min。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,還包括:依據(jù)干擾物的保
留時間判斷干擾物的存在。