本發明屬于藥物分析領域，涉及中成藥六味地黃系列制劑中兩種新發現藥理活性成分葡萄糖二酸鹽及葡萄糖二酸1，4內酯含量測定方法。本發明利用NaCO溶液或60%甲醇溶液提取六味地黃制劑中的葡萄糖二酸（鹽）及（或）葡萄糖二酸1，4內酯。采用親水色譜HPLC-HILIC-UV/ELSD/MS等分離檢測技術對這兩種化合物進行定量分析。本發明首次建立了六味地黃制劑中葡萄糖二酸鹽及其內酯的含量測定方法,為六味地黃系列制劑質量控制提供了新的思路和方法。

1.六味地黃制劑中葡萄糖二酸鹽及葡萄糖二酸1,4內酯含量測定方法，其特征在于包括：?????1）葡萄糖二酸鹽和葡萄糖二酸1，4內酯標準溶液的制備：分別精密稱取葡萄糖二酸鹽和葡萄糖二酸1，4內酯兩種對照品40.0mg，定量轉移至10.0mL容量瓶中，加水稀釋到刻度，精密移取5.0mL至10.0mL容量瓶中，加80%乙腈稀釋至刻度，配制成200.0μg/mL溶液，作為對照品母溶液；2）HPLC-HILIC-UV/ELSD法測定六味地黃丸中總葡萄糖二酸鹽的含量：取六味地黃丸，粉碎，精密稱取500mg，加入4.0mL?2-5%Na₂CO₃溶液超聲20min，離心，沉淀再用等體積上述溶液提取一次，離心，合并上清液；采用C18?SPE小柱萃取，收集5%甲醇洗脫部分，用高速真空離心，干燥機55℃干燥，干燥物準確加入1.0mL?80%乙腈，10，000轉離心10min取上清液進行HPLC-HILIC-UV/ELSD分析，以標準曲線法對葡萄糖二酸鹽進行定量；HPLC-HILIC-UV法色譜條件：色譜柱為ZIC-HILIC?長250mm,內徑4.6mm,?顆粒度5μm；以乙腈-5mM磷酸二氫銨為流動相，兩者體積比為78:22恒度洗脫；流速0.8mL/min；檢測波長205nm；進樣10μl，柱溫30℃；HPLC-HILIC-ELSD法色譜條件：色譜柱為ZIC-HILIC?ZIC-HILIC?長250mm,內徑4.6mm,?顆粒度5μm；以乙腈A相-0.02%醋酸胺B相為流動相梯度洗脫：0-5min?A相80%，5-25min?A相80%-75%，25-30min?A相為75%-50%，30-35min?A相為50%-80%；流速0.8mL/min；進樣10μl，漂移管溫度60℃，氣流1.2L/min；3）六味地黃丸中葡萄糖二酸1,4內酯含量測定：取六味地黃丸，粉碎，精密稱取500mg，加4.0?mL?60%甲醇溶液，超聲20min，5,000轉離心10min取上清液，殘渣繼續加4.0mL?60%甲醇溶液，超聲20min，5000轉離心10min取上清液，合并上清液，14,000轉離心后適當稀釋進樣UPLC-MS/MS分析；色譜條件：Waters?BEH?C18色譜柱，長50mm,內徑1.0?mm,粒徑1.7μm，柱溫：40℃；流動相：A相為10mM甲酸，B相為乙腈；流速0.4mL/min；質譜條件：電噴霧負離子源ESI-，電壓2000V，?source?temp?100℃,?錐孔電壓15V，脫溶劑氣溫度300℃，錐孔氣和脫溶劑氣流量分別為50和600L/min；全掃描模式50~1200amu；二級碰撞能量15V；分子離子峰191的碎片峰85的強度用于葡萄糖1.4-內酯的定量；以標準曲線法對葡萄糖二酸1，4內酯進行定量；4）六味地黃丸中葡萄糖二酸鹽及葡萄糖二酸1,4內酯同時檢測：取六味地黃丸，粉碎，精密稱取500mg，加4.0?mL?60%甲醇溶液，超聲20min，5,000轉離心10min取上清液，殘渣繼續加4.0mL?60%甲醇溶液，超聲20min，5000轉離心10min取上清液，合并上清液，14,000轉離心后適當稀釋進樣HPLC-LILIC-UV分析；HPLC-HILIC-UV法色譜條件：色譜柱為ZIC-HILIC?長250mm,內徑4.6mm,?顆粒度5μm；以乙腈A相-5mM磷酸二氫銨+1.0%磷酸B相為流動相，流動相梯度洗脫程序：0-3min?A相83%，3-15min?A相83-65%，15-18min?A相65%，18-20min?A相65-83%，20-30min?A相83%；檢測波長205nm；進樣10μl，柱溫30℃；以標準曲線法對葡萄糖二酸鹽和葡萄糖二酸1，4內酯進行同時定量。2.如權利要求1所述方法，其特征在于所述Na₂CO₃溶液濃度為2.0%。