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頭孢氨芐殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒及其應(yīng)用

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-15
  • 技術(shù)成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN200810222094.1 
  • 技術(shù)(專利)名稱 頭孢氨芐殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒及其應(yīng)用 
  • 項目單位 中國檢驗檢疫科學(xué)研究院
  • 發(fā)明人 金涌,鄒明強,陳立本,王羚鴻,郝剛 
  • 行業(yè)類別
  • 技術(shù)成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 楊熙焱
  • 發(fā)布時間 2021-12-15  
  • 01

    項目簡介

    一種頭孢氨芐殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,其中設(shè)置有以下成分:包被有包被原的酶標(biāo)板,所述包被原為頭孢氨芐與載體蛋白的偶聯(lián)物;頭孢氨芐特異性抗體;酶標(biāo)記物;頭孢氨芐標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0μg/L-5μg/L;底物顯色液;終止液;濃縮洗滌液;和樣品稀釋液。本發(fā)明的檢測動物性食品中頭孢氨芐殘留的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒主要采用間接競爭ELISA方法定性或定量檢測牛奶及動物組織(豬、牛的肌肉、肝臟、腎臟等)中頭孢氨芐的殘留量,樣品前處理過程簡單,能同時檢測大批樣品。測定方法簡單、省時,整個檢測過程只需1.5小時就可以完成。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種頭孢氨芐殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的制備方法,其特征在于:
    (1)蛋白偶聯(lián)抗原的合成:
    A.頭孢氨芐免疫抗原的合成:將頭孢氨芐和牛血清白蛋白采用碳二亞胺法進行偶聯(lián)得到
    免疫抗原;具體操作如下:取頭孢氨芐15mg溶于5mL?0.01mol/L,pH?7.4的PBS中,加入
    25mg碳二亞胺和10mgN-羥基琥珀酰亞胺攪拌30分鐘,取牛血清白蛋白10mg溶于活化的
    頭孢氨芐溶液中,25℃攪拌反應(yīng)2小時,再4℃反應(yīng)過夜;4℃條件下,用PBS透析3天,得
    到頭孢氨芐免疫抗原,分裝凍存;
    B.頭孢氨芐包被抗原的合成:將頭孢氨芐和卵清蛋白采用戊二醛法進行偶聯(lián)得到包被抗
    原;具體操作如下:取頭孢氨芐10mg溶于5mL?0.01mol/L,pH?7.4的PBS中,加入1%戊二
    醛溶液攪拌30分鐘,取卵清蛋白30mg溶于1mL?PBS,加入到活化的頭孢氨芐溶液中,25℃
    攪拌反應(yīng)2小時,4℃反應(yīng)過夜;4℃條件下,用PBS透析3天,得到頭孢氨芐包被抗原,分
    裝凍存;
    (2)單克隆抗體的制備:
    A.動物免疫:將合成的免疫原與等量的弗氏完全佐劑乳化,腹腔注射8周齡雌性BALB/C
    小鼠,劑量為100μg/只;然后以100μg/只的劑量加弗氏不完全佐劑腹腔注射加強免疫3次,
    間隔2周;
    B.細胞融合和克隆化:取免疫小鼠的脾細胞,按5∶1比例與Sp2/0骨髓瘤細胞融合,制
    備雜交瘤細胞;采用有限稀釋法篩選能夠穩(wěn)定分泌頭孢氨芐單克隆抗體的雜交瘤細胞株,擴
    大培養(yǎng)后液氮凍存;
    C.單克隆抗體的制備與純化:使用雌性BALB/C純系小鼠,腹腔注射弗氏不完全佐劑0.5
    mL/只,5天后腹腔注射雜交瘤細胞106個/只,7天后取小鼠腹水,經(jīng)辛酸-飽和硫酸銨法進行純
    化,分裝,-20℃保存;
    (3)試劑盒的制備:
    A.酶標(biāo)板的制備:
    用包被緩沖液將頭孢氨芐包被抗原稀釋成0.5-1μg/mL,每孔加入100μL,37℃溫育2h再
    4℃過夜,傾去包被液,用稀釋20倍的濃縮洗滌液洗滌4次,每次30秒,拍干,然后在每孔
    中加入200μL封閉液,37℃溫育2h,傾去孔內(nèi)液體,干燥后用鋁膜真空密封保存;
    B.所用試劑的配置:
    1)頭孢氨芐系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液,其濃度分別為0μg/L,0.05μg/L,0.1μg/L,0.5μg/L,1μg/L,
    5μg/L;
    2)蛋白濃度為0.1-1mg/L的辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG;
    3)蛋白濃度為0.1-1mg/L的頭孢氨芐單克隆抗體;
    4)底物顯色液由A液和B液組成,A液為用0.1mol/L?pH5.0的檸檬酸緩沖液配制成0.1-1
    mg/mL的過氧化脲溶液,B液為四甲基聯(lián)苯胺先用無水乙醇配制2mg/mL的溶液,再用0.1
    mol/L?pH5.0的檸檬酸緩沖液配制成0.1-1mg/mL溶液;
    5)終止液為1-2mol/L硫酸;
    6)濃縮洗滌液為pH7.4含0.8-1.2%吐溫20的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液;
    7)樣品稀釋液為0.1%-1%牛血清白蛋白的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液。
    展開

專利技術(shù)附圖

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    轉(zhuǎn)讓申請書

    轉(zhuǎn)讓協(xié)議

  • 手續(xù)合格通知書

    專利證書

    專利利登記簿副本

安全保障

  • 品類齊全

    海量資源庫,平臺整合幾十萬閑置資源。
  • 交易保障

    完善的資金保障體系確保買賣雙方資金安全。
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