本發(fā)明公開(kāi)了一種基于鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶的葡萄糖檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明利用葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成過(guò)氧化氫，鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化3?甲基?2?苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽和N?乙基?N?（2?羥基?3?磺丙基）?3?甲基苯胺鈉鹽偶合顯色，提供了一種快速、簡(jiǎn)便、靈敏的葡萄糖檢測(cè)新方法。該檢測(cè)新方法所用鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶制備簡(jiǎn)便易得，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)血清中的葡萄糖進(jìn)行可視化分析，具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，易于推廣使用。

1.一種基于鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶的葡萄糖檢測(cè)方法，其特征是將葡萄糖氧化酶，
葡萄糖溶液，磷酸鹽緩沖液混合，溫浴后加入磷酸鹽緩沖液， 3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽
酸鹽, N-乙基-N-（2-羥基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺鈉鹽，鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶水溶液，
溫浴后目視觀察或測(cè)定紫外可見(jiàn)吸收；所述的鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶由以下步驟制得
的：在5 mL濃度為50 mg/mL的牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL 濃度為16 mmol/L氯鉑酸溶
液和0.5 mL 濃度為1.5 mol/L氫氧化鈉溶液，混勻后水浴80 ℃反應(yīng)2 h，反應(yīng)后溶液裝入
截止分子量為3k的超濾管，6000 r/min離心超濾，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-納米鉑水
溶液，將牛血清白蛋白-納米鉑水溶液冷凍干燥得到牛血清白蛋白-納米鉑粉末，在0.6 mL
濃度為23.8 mg/mL的牛血清白蛋白-鉑水溶液中加入0.6 mL濃度為0.5 mmol/L的硝酸鉍溶
液和1.8 mL濃度為10 mmol/L，pH=7的磷酸鹽緩沖液，混勻后水浴80 ℃反應(yīng)2.5 h，反應(yīng)后
溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000 r/min離心超濾，并水洗3次，得到鉑鉍納米模擬
過(guò)氧化物酶的水溶液，將鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶水溶液冷凍干燥得到鉑鉍納米模擬過(guò)氧
化物酶粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶的葡萄糖檢測(cè)方法，其特征是
將80 μL濃度為180 U/mL的葡萄糖氧化酶與640 μL不同濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，80 μL濃度
為10 mmol/L，pH=7的磷酸鹽緩沖液混合，37℃溫浴30 min，加入1.3 mL濃度為10 mmol/L，
pH=7的磷酸鹽緩沖液，1 mL濃度為0.5 mmol/L的3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽, 800 μ
L濃度為3 mmol/L的N-乙基-N-（2-羥基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺鈉鹽，100 μL濃度為4.76
mg/mL鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶水溶液，37℃溫浴30 min，目視觀察溶液顏色或測(cè)定紫外可
見(jiàn)吸收。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶的葡萄糖檢測(cè)方法，其特征
是顯色產(chǎn)物溶液顏色為紫色，隨著葡萄糖濃度的增大，溶液顏色加深，目視觀察溶液顏色的
檢測(cè)限為5 μmol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶的葡萄糖檢測(cè)方法，其特征
是顯色產(chǎn)物最大吸收波長(zhǎng)為590 nm，根據(jù)590 nm波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，其檢測(cè)
的線性范圍為1~100 μmol/L，檢測(cè)限為0.2 μmol/L。
5.一種基于鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶的葡萄糖檢測(cè)試劑盒，其特征是試劑盒中包括a
液、b液、標(biāo)準(zhǔn)液、酶液和樣品稀釋液，所述a液中含有3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽和
N-乙基-N-（2-羥基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺鈉鹽，b液中含有鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶溶
液，標(biāo)準(zhǔn)液為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，酶液為葡萄糖氧化酶溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種基于鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶的葡萄糖檢測(cè)試劑盒，其
特征是a液中含有濃度為0.28 mmol/L 的3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽和濃度為1.33
mmol/L的N-乙基-N-（2-羥基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺鈉鹽；b液中含有用10 mmol/L，pH=7的
磷酸鹽緩沖液配制的濃度為0.34 mg/mL的鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶溶液；標(biāo)準(zhǔn)液包括濃度
為6.25，31.25，62.5，125，250，375，500，625 μmol/L的葡萄糖溶液；酶液包括用10 mmol/L，
pH=7的磷酸鹽緩沖液配制的濃度為90 U/mL的葡萄糖氧化酶溶液；樣品稀釋液包括10
mmol/L，pH=7的磷酸鹽緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的一種基于鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶的葡萄糖檢測(cè)試劑盒，
其特征是所述的鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶由以下步驟制得的：在5 mL濃度為50 mg/mL的牛
血清白蛋白水溶液中加入5 mL 濃度為16 mmol/L氯鉑酸溶液和0.5 mL 濃度為1.5 mol/L
氫氧化鈉溶液，混勻后水浴80 ℃反應(yīng)2 h，反應(yīng)后溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000
r/min離心超濾，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-納米鉑水溶液，將牛血清白蛋白-納米鉑水
溶液冷凍干燥得到牛血清白蛋白-納米鉑粉末，在0.6 mL濃度為23.8 mg/mL的牛血清白蛋
白-鉑水溶液中加入0.6 mL濃度為0.5 mmol/L的硝酸鉍溶液和1.8 mL濃度為10 mmol/L，pH
=7的磷酸鹽緩沖液，混勻后水浴80 ℃反應(yīng)2.5 h，反應(yīng)后溶液裝入截止分子量為3k的超濾
管，6000 r/min離心超濾，并水洗3次，得到鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶的水溶液，將鉑鉍納米
模擬過(guò)氧化物酶水溶液冷凍干燥得到鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶粉末。
8.權(quán)利要求5-7任一所述的一種基于鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶的葡萄糖檢測(cè)試劑盒的
應(yīng)用，其特征是作為葡萄糖檢測(cè)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種基于鉑鉍納米模擬過(guò)氧化物酶的葡萄糖檢測(cè)試劑盒的應(yīng)
用，其特征是在640 μL標(biāo)準(zhǔn)液中加入160 μL酶液，37℃溫浴30 min，加入1.8 mL a液和1.4
mL b液，37℃溫浴30 min，測(cè)定590 nm處的吸光度，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算回歸方程；
在40 μL人血清樣品中加入600 μL樣品稀釋液，160 μL酶液，37℃溫浴30 min，加入1.8 mL
a液和1.4 mL b液， 37℃溫浴30 min，測(cè)定590 nm處的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程，
計(jì)算血清樣品中葡萄糖的含量。