本發(fā)明提供了一種電致化學(xué)發(fā)光成像方法快速分析單細胞內(nèi)成分的方法利用，魯米諾電致化學(xué)發(fā)光被首次應(yīng)用于單細胞內(nèi)生物分子(如葡萄糖)的檢測。在檢測過程中，單個細胞被直接定位在單個細胞大小的微洞電極；加入含有魯米諾、曲通100和葡萄糖氧化酶的混合溶液后，曲通100可以破壞細胞膜，釋放細胞內(nèi)的葡萄糖到微洞中，和洞內(nèi)的葡萄糖氧化酶反應(yīng)生成過氧化氫；過氧化氫與魯米諾反應(yīng)在正電位下產(chǎn)生光信號。這種新發(fā)明的電化學(xué)發(fā)光測定方法將有可能被應(yīng)用于對單細胞中更多的細胞內(nèi)分子進行快速分析，以闡明細胞間的異質(zhì)性。

1.一種電致化學(xué)發(fā)光成像方法快速分析單細胞內(nèi)成分的方法，待檢測的成分在對應(yīng)的
氧化酶的作用下催化產(chǎn)生雙氧水，其特征在于，包括如下步驟：
（1）提供表面具有若干微孔的氧化銦錫電極表面作為微電極，將該微電極作為工作電
極與電化學(xué)工作站連接，銀/氯化銀和鉑電極分別作為參比電極和輔助電極，通過電沉積將
金納米顆粒沉積到微電極的微孔表面；其中，所謂微電極表面設(shè)置有64-256個用于容納單
個細胞的微孔；
（2）以含有200-500 μM L012的10-20 mM PBS的混合溶液作為氧化銦錫片發(fā)光成像的
溶液加入到微孔中，將待分析的單個細胞設(shè)置于微孔內(nèi)，加入表面活性劑和待分析成分對
應(yīng)的氧化酶，使用電壓發(fā)生器施加正負交替的電壓在電極上誘使發(fā)光，然后使用電化學(xué)發(fā)
光成像裝置連續(xù)采集曝光時間為60s的兩張照片，來收集來自細胞的發(fā)光信號；
（3）使用Image J軟件計算兩個圖像中發(fā)光強度的差異，同時為了校準來自ITO微孔處
的發(fā)光差異，將50-100 μM過氧化氫水溶液引入微孔內(nèi)并對微孔發(fā)光的光強進行采集，在微
電極的微孔內(nèi)的單個細胞的發(fā)光強度和加入的過氧化氫收集到的發(fā)光強度的比率作為信
號被用于細胞內(nèi)成分的分析檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述的待檢測成分為葡萄糖、乳酸或膽固醇中的
任意一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中，金納米顆粒的電沉積通過在含
有 1-5 mM HAuCl₄的0.1 M HCl溶液中，循環(huán)掃描得到，其中，電勢由?0.2 V到0.55 V，循環(huán)
掃描400-800s。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述電壓發(fā)生器施加的正負交
替的電壓為1 V，2 s 和-1 V， 0.5 s。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述的表面活性劑為0.1-0.5
%的Triton X-100，所述的氧化酶為濃度為0.1 -0.5 U/mL的葡萄糖氧化酶。