1.定性和定量測定植物活性多糖高效液相色譜-串聯質譜法,其特征在于包
括以下步驟:
(1)樣品前處理:
A.固體樣品:將樣品與超純水按10mg:1ml混合,充分搖勻,制成待檢
樣液;
B.液體樣品:將樣品充分混勻后得到待檢樣液;
(2)衍生化:將待檢樣液、混合多糖溶液以及標準葡萄糖溶液用3-氨基-9-
乙基咔唑分別進行衍生化處理;
(3)質譜定性:以AEC衍生化的混合多糖溶液為參照,對AEC衍生化的
待檢樣液進行質譜離子碎片峰的確證,確定還原性多糖的聚合度,對待檢樣液
中所含還原性聚合多糖的種類進行定性;
(4)HPLC定量:對AEC衍生化的待檢樣液和AEC衍生化的標準葡萄糖
溶液分別進行高效液相色譜分析;用AEC衍生化的標準葡萄糖溶液作為參比,
分析制作標準葡萄糖曲線,以此對待檢樣液中各類還原性聚合多糖進行間接定
量;
步驟(1)中所述的樣品中的目標檢測物為植物或植物提取物中的多糖;
步驟(3)中所述的質譜定性的條件為液相色譜質譜條件,具體如下:流動
相的比例為水相和有機相按體積比70:30配比,其中水相為含0.1mol/L乙酸銨
的水溶液,經0.45μm水相濾膜過濾,有機相為純乙腈;色譜柱為Waters?C18;
流速為0.4mL/min;柱溫為40℃;進樣量為5~20μL;檢測波長為254nm;
質譜條件:離子化模式為電噴霧離子化;掃描模式為正離子Q1全掃描;離
子掃描范圍為m/z350~1500;
步驟(4)中所述的高效液相色譜分析的條件為:流動相的比例為水相和有
機相按體積比70:30配比,其中水相為含0.1mol/L乙酸銨的水溶液,經0.45μm
水相濾膜過濾,有機相為純乙腈;色譜柱為Waters?C18;流速為0.4mL/min;柱
溫為40℃;進樣量為5~20μL;檢測波長為254nm。
2.根據權利要求1所述的定性和定量測定植物活性多糖高效液相色譜-串聯
質譜法,其特征在于:步驟(2)中所述的混合多糖為Dextran?Standard?DXT1K?
Mw1200。
3.根據權利要求1所述的定性和定量測定植物活性多糖的高效液相色譜-
串聯質譜方法,其特征在于:
步驟(2)中所述的3-氨基-9-乙基咔唑衍生化處理的具體步驟如下:
①將3-氨基-9-乙基咔唑溶解于甲醇中,3-氨基-9-乙基咔唑的終濃度
0.04mol/L,得到AEC甲醇溶液;
②用水配制氰基硼氫化鈉,得到濃度為0.2mol/L的氰基硼氫化鈉溶液;
③分別在待檢樣液、混合多糖溶液和標準葡萄糖溶液中加入步驟①制備的
AEC甲醇溶液、步驟②制備的0.2mol/L的氰基硼氫化鈉溶液和冰醋酸,其中待
檢樣液、混合多糖溶液和標準葡萄糖分別同AEC甲醇溶液、氰基硼氫化鈉溶液
和冰醋酸的體積比為10:10:10:3;混勻,于70℃水浴加熱1h,冷卻后加入水,
搖勻后,用氯仿進行洗滌,離心,取水相,得到AEC衍生化的待檢多糖樣液、
AEC衍生化的混合多糖溶液和AEC衍生化的標準葡萄糖溶液。
4.根據權利要求3所述的定性和定量測定植物活性多糖高效液相色譜-串聯
質譜法,其特征在于:
步驟③中所述的混合多糖溶液的濃度為0.01mol/L;
步驟③中所述的標準葡萄糖溶液的濃度為0.01mol/L;
步驟②和③中所述的水為超純水;
步驟③中所述的洗滌的次數為2~3次;
步驟③中所述的離心的條件為5000rpm/min離心5min;
步驟③中所述的水相通過過濾純化。
5.根據權利要求4所述的定性和定量測定植物活性多糖高效液相色譜-串聯
質譜法,其特征在于:所述的過濾的條件為使用0.45μm濾膜過濾。
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