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定性和定量測定植物活性多糖高效液相色譜-串聯質譜法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-21
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310004268.8 
  • 技術(專利)名稱 定性和定量測定植物活性多糖高效液相色譜-串聯質譜法 
  • 項目單位 廣州市宜健醫學技術發展有限公司
  • 發明人 潘若微,李丹,胡燁敏,吳軍,孟平,王家驥,陳驍熠 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 周蠱驪
  • 發布時間 2021-12-21  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種定性和定量測定植物活性多糖高效液相色譜-串聯質譜法。本發明首先對待檢多糖樣液、混合多糖溶液以及標準葡萄糖溶液分別進行3-氨基-9-乙基咔唑衍生化處理,得到AEC衍生化的待檢多糖、混合多糖溶液以及標準葡萄糖溶液;質譜分析,以AEC衍生化的混合多糖對照為參照,對待檢多糖樣液進行多糖離子碎片峰的確證,確定還原性多糖的聚合度,對待檢多糖中所含還原性聚合多糖的種類進行定性;高效液相色譜分析,用AEC衍生化的標準單糖作為參比,分析制作標準葡萄糖曲線,以此對待檢多糖中各類還原性聚合多糖進行間接定量。
    展開
  • 02

    說明書

    1.定性和定量測定植物活性多糖高效液相色譜-串聯質譜法,其特征在于包
    括以下步驟:
    (1)樣品前處理:
    A.固體樣品:將樣品與超純水按10mg:1ml混合,充分搖勻,制成待檢
    樣液;
    B.液體樣品:將樣品充分混勻后得到待檢樣液;
    (2)衍生化:將待檢樣液、混合多糖溶液以及標準葡萄糖溶液用3-氨基-9-
    乙基咔唑分別進行衍生化處理;
    (3)質譜定性:以AEC衍生化的混合多糖溶液為參照,對AEC衍生化的
    待檢樣液進行質譜離子碎片峰的確證,確定還原性多糖的聚合度,對待檢樣液
    中所含還原性聚合多糖的種類進行定性;
    (4)HPLC定量:對AEC衍生化的待檢樣液和AEC衍生化的標準葡萄糖
    溶液分別進行高效液相色譜分析;用AEC衍生化的標準葡萄糖溶液作為參比,
    分析制作標準葡萄糖曲線,以此對待檢樣液中各類還原性聚合多糖進行間接定
    量;
    步驟(1)中所述的樣品中的目標檢測物為植物或植物提取物中的多糖;
    步驟(3)中所述的質譜定性的條件為液相色譜質譜條件,具體如下:流動
    相的比例為水相和有機相按體積比70:30配比,其中水相為含0.1mol/L乙酸銨
    的水溶液,經0.45μm水相濾膜過濾,有機相為純乙腈;色譜柱為Waters?C18;
    流速為0.4mL/min;柱溫為40℃;進樣量為5~20μL;檢測波長為254nm;
    質譜條件:離子化模式為電噴霧離子化;掃描模式為正離子Q1全掃描;離
    子掃描范圍為m/z350~1500;
    步驟(4)中所述的高效液相色譜分析的條件為:流動相的比例為水相和有
    機相按體積比70:30配比,其中水相為含0.1mol/L乙酸銨的水溶液,經0.45μm
    水相濾膜過濾,有機相為純乙腈;色譜柱為Waters?C18;流速為0.4mL/min;柱
    溫為40℃;進樣量為5~20μL;檢測波長為254nm。
    2.根據權利要求1所述的定性和定量測定植物活性多糖高效液相色譜-串聯
    質譜法,其特征在于:步驟(2)中所述的混合多糖為Dextran?Standard?DXT1K?
    Mw1200。
    3.根據權利要求1所述的定性和定量測定植物活性多糖的高效液相色譜-
    串聯質譜方法,其特征在于:
    步驟(2)中所述的3-氨基-9-乙基咔唑衍生化處理的具體步驟如下:
    ①將3-氨基-9-乙基咔唑溶解于甲醇中,3-氨基-9-乙基咔唑的終濃度
    0.04mol/L,得到AEC甲醇溶液;
    ②用水配制氰基硼氫化鈉,得到濃度為0.2mol/L的氰基硼氫化鈉溶液;
    ③分別在待檢樣液、混合多糖溶液和標準葡萄糖溶液中加入步驟①制備的
    AEC甲醇溶液、步驟②制備的0.2mol/L的氰基硼氫化鈉溶液和冰醋酸,其中待
    檢樣液、混合多糖溶液和標準葡萄糖分別同AEC甲醇溶液、氰基硼氫化鈉溶液
    和冰醋酸的體積比為10:10:10:3;混勻,于70℃水浴加熱1h,冷卻后加入水,
    搖勻后,用氯仿進行洗滌,離心,取水相,得到AEC衍生化的待檢多糖樣液、
    AEC衍生化的混合多糖溶液和AEC衍生化的標準葡萄糖溶液。
    4.根據權利要求3所述的定性和定量測定植物活性多糖高效液相色譜-串聯
    質譜法,其特征在于:
    步驟③中所述的混合多糖溶液的濃度為0.01mol/L;
    步驟③中所述的標準葡萄糖溶液的濃度為0.01mol/L;
    步驟②和③中所述的水為超純水;
    步驟③中所述的洗滌的次數為2~3次;
    步驟③中所述的離心的條件為5000rpm/min離心5min;
    步驟③中所述的水相通過過濾純化。
    5.根據權利要求4所述的定性和定量測定植物活性多糖高效液相色譜-串聯
    質譜法,其特征在于:所述的過濾的條件為使用0.45μm濾膜過濾。
    展開

專利技術附圖

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