1.一種補陽還五湯的鑒別和含量測定方法，所述補陽還五湯是由如下原料及方法
制備，取黃芪120g，當歸6g，赤芍5g，川芎3g、紅花3g、桃仁3g、地龍3g，于砂
鍋中加相當于飲片10倍量的水，浸泡30min，煎煮30min，煎煮2次，兩層紗布過濾，
合并濾液，濃縮，定容至300mL，制備成補陽還五湯，其特征在于包括以下鑒別方法和
同時測定芍藥苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、槲皮素的含量測定方法：
A.黃芪的TLC鑒別：取上述補陽還五湯10mL，用水飽和的正丁醇振搖提取，每
次20mL，提取3次，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌，每次20mL，洗滌2次，棄
去氨試液，取正丁醇提取液，水浴蒸干，殘渣加蒸餾水3～5mL使之溶解，通過內徑
為1.5cm，長度為12cm的D101大孔樹脂柱，加蒸餾水50mL洗脫，棄去水液，再
用40％乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，再用70％乙醇80mL洗脫，收集洗脫液，水浴蒸
干，用甲醇定容至5mL容量瓶，作為補陽還五湯供試品溶液；另精密稱取黃芪對照藥
材4g，粉碎，于砂鍋中加相當于飲片10倍量的水，浸泡30min，煎煮30min，煎煮2
次，兩層紗布過濾，合并濾液，濃縮，定容至10mL，制備成黃芪提取湯，用水飽和的
正丁醇振搖提取，每次20mL，提取3次，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌，每次20
mL，洗滌2次，棄去氨試液，取正丁醇提取液，水浴蒸干，殘渣加蒸餾水3～5mL使
之溶解，通過內徑為1.5cm，長度為12cm的D101大孔樹脂柱，加蒸餾水50mL洗
脫，棄去水液，再用40％乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，再用70％乙醇80mL洗脫，收
集洗脫液，水浴蒸干，用甲醇定容至5mL容量瓶，制成黃芪對照藥材溶液；再按補陽
還五湯制備方法制備缺黃芪的補陽還五湯陰性樣品，即取當歸6g，赤芍5g，川芎3g、
紅花3g、桃仁3g、地龍3g，于砂鍋中加相當于飲片10倍量的水，浸泡30min，煎煮
30min，煎煮2次，兩層紗布過濾，合并濾液，濃縮，定容至300mL，制備成缺黃芪的
補陽還五湯，取20mL，用水飽和的正丁醇振搖提取，每次20mL，提取3次，合并正丁
醇提取液，用氨試液洗滌，每次20mL，洗滌2次，棄去氨試液，取正丁醇提取液，水
浴蒸干，殘渣加蒸餾水3～5mL使之溶解，通過內徑為1.5cm，長度為12cm的D101
大孔樹脂柱，加蒸餾水50mL洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，
再用70％乙醇80mL洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，用甲醇定容至5mL容量瓶，作為
缺黃芪的陰性對照溶液，分別吸取上述3種溶液，即補陽還五湯供試品溶液、黃芪對
照藥材溶液、缺黃芪的陰性對照溶液，各10μL，點于同一硅膠G薄層板上，以體積
比為30∶10∶1的二氯甲烷-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇
溶液，于105℃加熱顯色，至斑點清晰，結果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相
應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾；
B.當歸薄層色譜鑒別：取上述補陽還五湯25ml，加熱蒸干，加入乙醚10mL，
加熱回流提取30min，放冷濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試
品溶液，另精密稱取當歸對照藥材0.5g，粉碎，于砂鍋中加相當于飲片10倍量的水，
浸泡30min，煎煮30min，煎煮2次，兩層紗布過濾，合并濾液，濃縮，定容至10mL，
制備成當歸提取湯，加熱蒸干，加入乙醚10mL，加熱回流提取30min，放冷濾過，濾
液水浴蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，制成當歸對照藥材溶液；再按補陽還五湯制備
方法制備缺當歸的補陽還五湯陰性樣品，即取黃芪120g，赤芍5g，川芎3g、紅花3g、
桃仁3g、地龍3g，于砂鍋中加相當于飲片10倍量的水，浸泡30min，煎煮30min，煎
煮2次，兩層紗布過濾，合并濾液，濃縮，定容至300mL，制備成缺當歸的補陽還五湯，
取25mL，加熱蒸干，加入乙醚10mL，加熱回流提取30min，放冷濾過，濾液水浴蒸干，
殘渣加乙醇1ml使溶解，作為缺當歸的陰性對照溶液，分別吸取上述三種溶液，即補
陽還五湯供試品溶液、當歸對照藥材溶液、缺當歸的陰性對照溶液，各10μL，分別點
于同一硅膠G薄層板上，以體積比為4∶1的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，
晾干，置于波長為365nm的紫外光燈下檢視，結果，供試品色譜中，在與對照藥材色
譜相應的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾；
C.赤芍的TLC鑒別：取上述補陽還五湯30mL，加熱蒸干，加入70％甲醇20mL，
超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2mL使溶解，作為供試品溶液；另精
密稱取赤芍對照藥材0.5g，粉碎，于砂鍋中加相當于飲片10倍量的水，浸泡30min，
煎煮30min，煎煮2次，兩層紗布過濾，合并濾液，濃縮，定容至10mL，制備成赤芍
提取湯，加熱蒸干，加入70％甲醇20mL，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加
乙醇2mL使溶解，制成赤芍對照藥材溶液；再按補陽還五湯制備方法制備缺赤芍的補
陽還五湯陰性樣品，即取黃芪120g，當歸6g，川芎3g、紅花3g、桃仁3g、地龍3g，
于砂鍋中加相當于飲片10倍量的水，浸泡30min，煎煮30min，煎煮2次，兩層紗布
過濾，合并濾液，濃縮，定容至300mL，制備成缺赤芍的補陽還五湯，取20mL，加熱
蒸干，加入70％甲醇20mL，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2mL使溶
解，作為缺赤芍的陰性對照溶液，吸取上述3種溶液，即補陽還五湯供試品溶液、赤
芍對照藥材溶液、缺赤芍的陰性對照溶液，各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，
以體積比為8∶1∶4的二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴
以5％香草醛硫酸溶液，于105℃加熱顯色，至斑點顯色清晰，結果，供試品色譜中，
在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色的斑點，陰性對照無干擾；
D.川芎的薄層色譜鑒別：取上述補陽還五湯100mL，加熱蒸干，加乙醚20mL，
回流提取30min，濾過，蒸干，殘渣加乙酸乙酯2ml，使溶解，作為供試品溶液；另
精密稱取川芎藥材1g，粉碎，于砂鍋中加相當于飲片10倍量的水，浸泡30min，煎
煮30min，煎煮2次，兩層紗布過濾，合并濾液，濃縮，定容至10mL，制備成川芎提
取湯，加熱蒸干，加乙醚20mL，回流提取30min，濾過，蒸干，殘渣加乙酸乙酯2ml，
使溶解，制成川芎對照藥材溶液；再按補陽還五湯制備方法制備缺川芎的補陽還五湯
陰性樣品，即取黃芪120g，當歸6g，赤芍5g，紅花3g、桃仁3g、地龍3g，于砂鍋
中加相當于飲片10倍量的水，浸泡30min，煎煮30min，煎煮2次，兩層紗布過濾，
合并濾液，濃縮，定容至300mL，制備成缺川芎的補陽還五湯，取100mL，加熱蒸干，
加乙醚20mL，回流提取30min，濾過，蒸干，殘渣加乙酸乙酯2ml，使溶解，作為缺
川芎的陰性對照溶液，分別吸取上述三種溶液，即補陽還五湯供試品溶液、川芎對照
藥材溶液、缺川芎的陰性對照溶液，各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體
積比為9∶1的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚溫度為60～90℃，展開，取出，晾干，
置波長為365nm的紫外光燈下檢視，結果，供試品溶液色譜中，在與對照藥材色譜相
應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；陰性對照無干擾；
所述同時測定補陽還五湯中芍藥苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、槲皮素的含量的方法：
色譜條件：色譜柱：長度為250mm，直徑為4.6mm，5μm的Hypersil?ODS2，
流動相：乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動相，梯度洗脫，梯度洗脫順序為0分鐘時，乙
腈與0.1％磷酸水溶液的體積比為8:92，15分鐘時，乙腈與0.1％磷酸水溶液的體積
比為10:90，25分鐘時，乙腈與0.1％磷酸水溶液的體積比為15:85，35分鐘時，乙腈
與0.1％磷酸水溶液的體積比為18:82，45分鐘時，乙腈與0.1％磷酸水溶液的體積比
為24:76，64分鐘時，乙腈與0.1％磷酸水溶液的體積比為36:64，73分鐘時，乙腈與
0.1％磷酸水溶液的體積比為45:55，80分鐘時，乙腈與0.1％磷酸水溶液的體積比為
66:34，流速：1mL·min-1，檢測波長：260nm，柱溫：30℃，進樣量10μL，采樣時
間：80min，
對照品溶液的制備:分別精密稱取芍藥苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、槲皮素對照品適
量，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成單個組分對照品母液，使
每1mL分別含芍藥苷1.954mg、毛蕊異黃酮葡萄糖苷1.728mg、槲皮素1.956mg，備用,
分別精密量取單個組分對照品溶液，加甲醇配成每1mL分別含芍藥苷0.1954mg、
毛蕊異黃酮葡萄糖苷0.1728mg、槲皮素0.1956mg的混合對照品液,
精密稱取補陽還五湯20mL，水浴蒸干，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，
密塞，稱定重量，超聲處理30min，取出，放冷至室溫，再稱定重量，加甲醇補足損
失的重量，搖勻，過濾，取續濾液，即得供試品溶液，過0.45μm的微孔濾膜，
含量測定：精密吸取對照品及供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；
按照補陽還五湯中芍藥苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、槲皮素含量計，不少于設定值
為合格。
2.根據權利要求1所述補陽還五湯的鑒別和含量測定方法，其特征在于補陽還五
湯成品中芍藥苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、槲皮素含量計，設定值為芍藥苷每毫升不得
少于0.025mg；毛蕊異黃酮葡萄糖苷每毫升不得少于0.10mg；槲皮素每毫升不得少于
0.05mg。
展開
