本發明涉及一種屬于藥物領域，尤其涉及一種同時測定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的檢測方法。超高液相色譜-三重四級桿質譜聯用技術同時測定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法，該方法包括以下的步驟：1）對照品的配制；2）內標溶液的配制；3）樣品溶液制備；4）流動相溶液的配制；5）色譜條件的設置；6）質譜條件的優化；7）樣品測定；8）梯度濃度對照品溶液的配制；9）標準曲線制備；10）數據分析計算。本發明具有以下的特點：1、方法先進性；2、方法快捷高效，低損耗；3、臨床應用前景及作用良好。

1.超高液相色譜-三重四級桿質譜聯用技術同時測定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法，其特征在于該方法包括以下的步驟：1）對照品的配制精密稱取萬古霉素、妥布霉素對照品，分別置于容量瓶中，加入純水溶解，配成所需質量濃度的對照品溶液，備用；2）內標溶液的配制精密稱取阿替洛爾對照品，置于容量瓶中，加入純水溶解，配成所需質量濃度的內標溶液，備用；3）樣品溶液制備精密量取骨髓炎患者術后組織引流液，置于具塞離心試管中，定量加入步驟2）的阿替洛爾內標溶液，渦旋混勻，精密加入乙腈沉淀蛋白，充分渦旋，高速離心后，分離上清液；上清液中加入適量二氯甲烷，充分渦旋，進行液液萃取，高速離心，定量吸取上清液，加等量純水稀釋，即得樣品溶液，備用；4）流動相溶液的配制精密量取色譜純乙腈，定量加入色譜純甲酸，配制成體積濃度為0.1%的甲酸乙腈溶液，作為流動相A相，備用；精密量取純水，定量加入色譜純甲酸，配制成體積濃度為0.1%的甲酸水溶液，作為流動相B相，備用；5）色譜條件的設置選擇以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，規格為2.1×100mm?，填料內徑為1.7μm的色譜柱；柱溫為45℃，流動相流速為0.3ml/min；取步驟1）的對照品溶液與步驟2）的內標溶液，定量進樣，進行梯度洗脫；流動相梯度洗脫程序如下：0-1.00min，5%A相和95%B相；1.00min-4.00min，40%A相和60%B相；4.00min-4.50min，99%A相和1%B相；4.50min-6.50min，99%A相和1%B相；6.50min-7.00min，5%A相和95%B相；7.00min-10.00min，5%A相和95%B相，進行梯度洗脫；采用二極管整列檢測器進行色譜峰檢測；6）質譜條件的優化選擇三重四級桿質譜儀，正離子模式下，采用MRM掃描模式，萬古霉素m/z：725-144；妥布霉素m/z：468-324；阿替洛爾m/z：267-74；取步驟1）對照品溶液、步驟2）的內標溶液，定量進樣，進行質譜分析，并由此得到對照品及內標物的標準質譜圖；7）樣品測定取步驟3）的樣品溶液，分別定量進樣，在步驟5）與步驟6）的條件下，測定，分別得到萬古霉素、妥布霉素對照品、阿替洛爾內標物以及樣品的總離子流圖，樣品圖譜中，與萬古霉素、妥布霉素對照品以及阿替洛爾內標物相同保留時間處，為引流液樣品中的待測萬古霉素與妥布霉素，以及定量加入的阿替洛爾內標物；8）梯度濃度對照品溶液的配制精密吸取步驟1）的對照品溶液，置于容量瓶中，加純水，稀釋成梯度濃度的萬古霉素對照品溶液以及妥布霉素對照品溶液，備用；9）標準曲線制備取骨髓炎患者空白組織液多份，分別定量加入步驟8）的梯度濃度對照品溶液，按照步驟3）方法操作，得到梯度加標樣品溶液，在步驟7）的條件下進行測定；以萬古霉素峰面積與內標物峰面積的比值對萬古霉素濃度進行線性回歸，得到回歸方程，為萬古霉素的標準曲線：y=35.522x+0.1351，r=0.9981；以妥布霉素峰面積與內標物峰面積的比值對妥布霉素濃度進行線性回歸，得到回歸方程，為妥布霉素的標準曲線：y=16.593x-0.0327，r=0.9959；其中y為被測物峰面積與內標物峰面積的比值，x為被測物質量濃度；?10）數據分析計算記錄萬古霉素，妥布霉素和阿替洛爾的峰面積，計算萬古霉素與內標阿替洛爾峰面積的比值和妥布霉素與內標阿替洛爾峰面積的比值，分別代入各自的標準曲線，計算出萬古霉素和妥布霉素的質量濃度；即為組織引流液中兩種藥物的局部濃度。2.根據權利要求1所述的超高液相色譜-三重四級桿質譜聯用技術同時測定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法，其特征在于步驟6）的質譜參數條件如下：毛細管電壓3KV，提取電壓30V，錐孔電壓3V，源溫度150℃，去溶劑溫度400℃，去溶劑氣750L/hr，錐孔氣50L/hr，碰撞氣流速0.15mL/min；妥布霉素二級質譜碰撞能20V，MRM掃描時間0.4～1min；阿替洛爾二級質譜碰撞能22V，MRM掃描時間2.5～3.5min；萬古霉素二級質譜碰撞能15V，MRM掃描時間3.3～4min。3.根據權利要求1所述的超高液相色譜-三重四級桿質譜聯用技術同時測定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法，其特征在于步驟8）定量稀釋成濃度梯度為10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1mg/mL、0.5mg/mL、0.1mg/mL的萬古霉素對照品溶液和1mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.1mg/mL、0.05mg/mL、0.025mg/mL的妥布霉素對照品溶液。4.根據權利要求1所述的超高液相色譜-三重四級桿質譜聯用技術同時測定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法，其特征在于步驟9）中取0.4mL骨髓炎患者空白組織液6份，編號1～6號，1號加入0.1mg/mL的萬古霉素對照品溶液和0.025mg/mL的妥布霉素對照品溶液各50μL；2號加入0.5mg/mL的萬古霉素對照品溶液和0.05mg/mL的妥布霉素對照品溶液各50μL；3號加入1mg/mL的萬古霉素對照品溶液和0.01mg/mL的妥布霉素對照品溶液各50μL；4號加入2.5mg/mL的萬古霉素對照品溶液和0.25mg/mL的妥布霉素對照品溶液各50μL；5號加入5mg/mL的萬古霉素對照品溶液和0.5mg/mL的妥布霉素對照品溶液各50μL；6號加入10mg/mL的萬古霉素對照品溶液和1mg/mL的妥布霉素對照品溶液各50μL。