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黃曲霉毒素B1流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒及其應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-25
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310115724.6 
  • 技術(專利)名稱 黃曲霉毒素B1流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒及其應用 
  • 項目單位 中國農業科學院油料作物研究所
  • 發明人 李培武,李冉,張奇,丁小霞,張文,張兆威 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 褚馨羽
  • 發布時間 2022-01-25  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及黃曲霉毒素B1流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒及其應用。它包括熒光試紙條和含有銪標記的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體凍干品的樣品反應瓶,其中所述熒光試紙條包括紙板,紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊和樣品墊,相鄰各墊在連接處交疊連接,檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊,硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線和檢測線,質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體,檢測線上包被黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物;所述抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體由保藏編號為CCTCC NO.C201015的雜交瘤細胞株分泌產生。其可用于黃曲霉毒素B1含量的定量測定,操作簡單、快速、準確度高。
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  • 02

    說明書

    1.黃曲霉毒素B1流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒,其特征在于:它包括熒光試紙條和含有銪標記的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體凍干品的樣品反應瓶,其中:所述的熒光試紙條包括紙板,紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊和樣品墊,相鄰各墊在連接處交疊連接,所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊,硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線和檢測線,所述質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體,所述檢測線上包被黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物;所述的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體為由保藏編號為CCTCC?NO.?C201015的雜交瘤細胞株AFB3G1分泌產生的單克隆抗體。2.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素B1流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒,其特征在于:所述銪標記的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體是按照以下方法制備得到的:將抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體用碳酸鹽緩沖溶液透析后和銪標記試劑以質量比為0.5~2:1的比例充分混勻后靜置過夜,然后經Sephadex?G-50層析柱分離銪標記的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體,洗脫,收集目標產物。3.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素B1流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒,其特征在于:所述熒光試紙條中的吸水墊長10~15mm,寬3~5mm;檢測墊長25~30mm,寬3~5mm;樣品墊長12~18mm,寬2~4mm,相鄰各墊的交疊長度為1~3mm;所述熒光試紙條中檢測墊上的檢測線與硝酸纖維素膜上沿的間距為15~20mm,質控線和檢測線的間距為5~10mm;所述的樣品反應瓶為1-5mL的卡口瓶。4.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素B1流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒,其特征在于:所述熒光試紙條中檢測墊上每厘米檢測線所需的黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物的包被量為60~120ng;每厘米質控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為30~90ng;所述樣品反應瓶中銪標記的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體凍干品的含量為0.1~0.3?μg。5.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素B1流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒,其特征在于:它還包括樣品稀釋液和樣品稀釋液吸管,所述的樣品稀釋液為體積分數為0.01~0.30%的吐溫-20水溶液。6.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素B1流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒的制備方法,其特征在于,所述的熒光試紙條的制備步驟如下:(1)將吸水紙剪裁得吸水墊;(2)檢測墊的制備:將黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白的偶聯物AFB1-BSA配制成濃度為0.1?~0.4mg/mL的包被液,于距硝酸纖維素膜上沿10~15mm的位置,用線噴方式將其橫向包被于硝酸纖維素膜上,得到檢測線,每厘米檢測線所需黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白的偶聯物AFB1-BSA的包被量為60~120ng,然后于37℃條件下干燥30~60分鐘;將兔抗鼠多克隆抗體配成濃度為0.1~0.5mg/mL的包被液,于距檢測線5~10mm的位置,用線噴方式將其橫向包被于硝酸纖維素膜上,得質控線,每厘米質控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為30~90ng,然后于37℃條件下干燥30~60分鐘;(3)樣品墊的制備:將玻璃纖維膜放入封閉液中浸濕,取出,于37℃條件下干燥4~6小時,得樣品墊,然后置干燥器中室溫保存;(4)?熒光試紙條的組裝:在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、樣品墊,相鄰各墊在連接處交疊連接,交疊長度為1~3?mm,即得熒光試紙條。7.根據權利要求6所述的黃曲霉毒素B1流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒的制備方法,其特征在于:所述熒光試紙條的制備中配制黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物(AFB1-BSA)包被液中所使用的包被緩沖液為:每10mL中含有牛血清白蛋白0.1g,疊氮化鈉0.002g,氯化鈉0.08g,十二水磷酸氫二鈉0.029g,氯化鉀0.002g,磷酸二氫鉀0.002g;配制兔抗鼠多克隆抗體包被液中所使用的包被緩沖液為:每10mL中含有疊氮化鈉0.002g,氯化鈉0.08g,十二水磷酸氫二鈉0.029g,氯化鉀0.002g,磷酸二氫鉀0.002g;所述熒光試紙條的制備中使用的封閉液為:每100mL中含有卵清白蛋白0.5-2g,蔗糖2g,疊氮化鈉0.02g,氯化鈉0.8g,十二水磷酸氫二鈉0.29g,氯化鉀0.02g,磷酸二氫鉀0.02g。8.根據權利要求1所述的流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒在黃曲霉毒素B1含量檢測中的應用:其特征在于,它是將待測樣品經前處理獲得待測樣品溶液后,加入樣品反應瓶中,混勻,插入熒光試紙條,37℃反應10分鐘后,用時間分辨熒光測試儀進行檢測,獲得熒光試紙條上檢測線時間分辨熒光強度與質控線時間分辨熒光強度的比值;基于預先獲得的熒光試紙條檢測線時間分辨熒光強度與質控線時間分辨熒光強度的比值與黃曲霉毒素B1濃度的關系曲線,獲得待測樣品溶液中黃曲霉毒素B1的含量,最后經換算即得待測樣品中黃曲霉毒素B1的含量。9.根據權利要求1所述的流動滯后免疫時間分辨熒光速測試劑盒在黃曲霉毒素B1含量檢測中的應用,其特征在于:所述的熒光試紙條檢測線時間分辨熒光強度與質控線時間分辨熒光強度的比值(T/C)與黃曲霉毒素B1濃度的關系曲線是采用以下方法得到的:(1)配制得到一系列濃度的黃曲霉毒素B1標準品溶液;(2)將適量上述各濃度的黃曲霉毒素B1標準品溶液分別加入到樣品反應瓶中,混勻,插入熒光試紙條,37℃反應10分鐘,用時間分辨熒光免疫分析儀檢測得到各熒光試紙條上檢測線和質控線的時間分辨熒光強度值,由此獲得各熒光試紙條檢測線時間分辨熒光強度與質控線時間分辨熒光強度的比值;(3)經擬合得到熒光試紙條檢測線時間分辨熒光強度與質控線時間分辨熒光強度的比值與黃曲霉毒素B1濃度的關系曲線。
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專利技術附圖

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