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黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條及其制備方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-21
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201110108224.0 
  • 技術(專利)名稱 黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條及其制備方法 
  • 項目單位 中國農業科學院油料作物研究所
  • 發明人 李培武,張道宏,張奇,張文,管笛,丁小霞,姜俊 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 許姝妍
  • 發布時間 2022-01-21  
  • 01

    項目簡介

    本發明屬生物檢測領域。黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條,其特征在于:包括紙板,紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊,相鄰各墊在連接處交疊連接,所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊,硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線和檢測線,所述檢測線包被有黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶聯物(AFM1-BSA),質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體;所述金標墊橫向噴涂有納米金標記的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體,所述抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO.C201018的雜交瘤細胞株2C9產生。該試紙條用于檢測黃曲霉毒素M1,具有檢測快速、操作簡單、靈敏度高的特點。
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  • 02

    說明書

    1.黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條,其特征在于:包括紙板,紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊,相鄰各墊在連接處交疊連接,所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊,硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線和檢測線,所述檢測線包被有黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶聯物,質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體;所述金標墊橫向噴涂有納米金標記的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體,所述抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體由保藏號為CCTCC?NO.?C201018的雜交瘤細胞株2C9產生。2.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條,其特征在于:所述的吸水墊長16~18mm,寬2~4mm;檢測墊長25~30mm,寬2~4mm;金標墊長6~9mm,寬2~4mm;樣品墊長12~18mm,寬2~4mm,相鄰各墊的交疊長度為1~3mm。3.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條,其特征在于:所述檢測墊上的檢測線與硝酸纖維素膜上沿的間距為15~20mm,質控線和檢測線的間距為5~10mm。4.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條,其特征在于:所述檢測墊上每厘米檢測線所需的黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶聯物的包被量為75~375ng;每厘米質控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為50~500ng。5.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條,其特征在于:所述金標墊中所用的納米金的粒徑為15~20nm;所述金標墊上每厘米噴涂長度所需的納米金標記的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體的用量為200~600ng。6.根據權利要求1或2所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條的制備方法,其特征在于:包括以下步驟:(1)吸水墊的制備將吸水紙剪裁即得吸水墊;(2)檢測墊的制備檢測線的包被:將黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白的偶聯物配制成0.1~0.5mg/mL的包被液A;于距離硝酸纖維素膜上沿為15~20mm的位置,用點噴方式將包被液A橫向包被于硝酸纖維素膜上得到檢測線,每厘米檢測線上所需黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白的偶聯物的包被量為75~375ng,然后于37~40℃條件下干燥5~20分鐘;質控線的包被:將兔抗鼠多克隆抗體配制成0.1~0.5mg/mL的包被液B;于距檢測線5~10mm的位置,用點噴方式將包被液B橫向包被于硝酸纖維素膜上,得到質控線,每厘米質控線上所需兔抗鼠多克隆抗體的包被量為50~500ng,然后于37~40℃條件下干燥5~20分鐘;(3)樣品墊的制備將玻璃纖維膜放入封閉液A中浸濕,取出,于37~40℃條件下干燥4~10小時,得樣品墊,然后置干燥器中室溫保存;(4)金標墊的制備將玻璃纖維膜放入封閉液B中浸濕,取出,于37~40℃條件下干燥4~10小時,于已干燥的玻璃纖維膜上,用點噴方式將納米金標記的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體溶液橫向進行噴涂,每厘米噴涂長度所需納米金標記的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體為200~600ng,然后真空冷凍干燥2~6h,置干燥器中室溫保存;所述的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體由保藏號為CCTCC?NO.?C201018的雜交瘤細胞株2C9產生;(5)試紙條的組裝在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊,相鄰各墊在連接處交疊連接,交疊長度為1~3mm,即得黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條;其中:所述的包被液A是按照下述方法配制得到的:將10~50mg市售黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶聯物,1~2g牛血清白蛋白,0.02~0.05g疊氮化鈉,0.8g氯化鈉,0.29g十二水磷酸氫二鈉,0.02g氯化鉀,0.02g磷酸二氫鉀,加水定容至100mL所得;所述的包被液B是按照下述方法配制得到的:將10~50mg兔抗鼠多克隆抗體,0.02~0.05g疊氮化鈉,0.8g氯化鈉,0.29g十二水磷酸氫二鈉,0.02g氯化鉀,0.02g磷酸二氫鉀,加水定容至100mL所得;所述的封閉液A?是按照下述方法配置得到的:將1~2g牛血清白蛋白,2~5g蔗糖,0.02~0.05g疊氮化鈉,0.8g氯化鈉,0.29g十二水磷酸氫二鈉,0.02g氯化鉀,0.02g磷酸二氫鉀,加水定容至100mL所得;所述的封閉液B是按照下述方法配制得到的:將1~2g牛血清白蛋白,0.1~0.2mL曲拉通X-100,0.3~05g聚乙烯吡咯烷酮,2~5g蔗糖,0.02~0.05g疊氮化鈉,0.8g氯化鈉,0.29g十二水磷酸氫二鈉,0.02g氯化鉀,0.02g磷酸二氫鉀,加水定容至100mL所得。7.根據權利要求6所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條的制備方法,其特征在于:所述納米金標記的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體溶液的標記方法為:取50.0mL市售質量濃度為0.01%的納米金溶液,調節溶液pH值為5.5;在攪拌的狀態下緩慢加入2.5mL?0.1mg/mL的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體水溶液,繼續攪拌30min;加入質量濃度為10%牛血清白蛋白水溶液至牛血清白蛋白的終質量濃度為1%,繼續攪拌30min;于4℃放置2h后,1500r/min離心15min,取上清液,棄沉淀;將上清液12000r/min離心30?min,棄去上清液,加入50.0mL標記洗滌保存液;再以12000r/min離心30?min,棄去上清液,將沉淀用標記洗滌保存液重懸,得到5.0mL濃縮物,置4℃冰箱備用,其中納米金標記的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體溶液的質量濃度為0.05mg/mL;所述的標記洗滌保存液是按照下述方法配制得到的:2.0g聚乙二醇20000,0.2g疊氮鈉,0.1235克硼酸,純水定容至1000mL,0.22μm濾膜過濾所得。8.一種權利要求1或2所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條的應用,其特征在于:取1mL待測液態牛乳及其制品,加入0.25~0.5mL水,混勻,得到樣品溶液,取100μL已稀釋好的樣品溶液做為檢測液逐滴滴加到一黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條的樣品墊,將其作為檢測試紙條,同時取1mL不含黃曲霉毒素M1的空白牛奶樣品,加0.25~0.5mL水,混勻,得到陰性對照溶液,取100μL陰性對照溶液,逐滴滴加到另一黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條的樣品墊,將其作為對照試紙條,15分鐘后讀取結果;檢測結果:(1)陽性:當檢測試紙條的質控線顯示出紅色線條,而檢測線不顯色時,或者質控線顯示出紅色線條,而檢測線顏色比對照試紙條檢測線顏色淺時,判為陽性,表明待測樣品中黃曲霉毒素M1的含量高于或等于0.5ng/mL;(2)陰性:當檢測試紙條的質控線和檢測線均顯示出紅色線條,并且檢測線顏色與對照試紙條檢測線顏色接近時,判為陰性結果,表明待測樣品中黃曲霉毒素M1的含量低于0.5ng/mL;(3)無效:當質控線不顯色時,無論檢測試紙條的檢測線顯示或不顯示紅色線條,該試紙條判為無效。
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