本發明公開了一種用于篩選微生物胞外膠原酶的酶譜方法，以利用膠原酶對膠原蛋白的特異性降解作用對膠原酶進行酶譜分析。電泳過程中所采用的凝膠為在10％SDS-PAGE凝膠中添加質量體積比濃度為0.1％的Ⅰ型膠原蛋白。凝膠的處理過程為：電泳結束后先將凝膠用洗脫液振蕩洗脫，隨后用漂洗液振蕩漂洗，最后將凝膠用孵育液在37℃下靜置孵育12h；孵育結束后將凝膠先經考馬斯亮藍R-250染色液染色1h，再經脫色液室溫振蕩脫色直至透明條帶清晰。該方法將Ⅰ型膠原蛋白配制到SDS-PAGE凝膠中,凝膠中Ⅰ型膠原蛋白的終濃度為0.1％，在該底物濃度下，膠原酶負染條帶以及標準蛋白質標準條帶能夠同時在凝膠上顯色，填補了膠原酶酶譜檢測領域的技術空白。

1.一種用于篩選微生物胞外膠原酶的酶譜方法，包括電泳和凝膠的處理步驟，其特征
在于，所述電泳過程中所采用的凝膠為在10％SDS-PAGE凝膠中添加質量體積比濃度為
0.1％的Ⅰ型膠原蛋白；
所述凝膠的處理過程為：電泳結束后先將凝膠用洗脫液在室溫條件下振蕩洗脫2次，隨
后用漂洗液在室溫條件下振蕩漂洗2次，最后將凝膠用孵育液在37℃下靜置孵育12h；孵育
結束后將凝膠先經質量體積比為0.1％的考馬斯亮藍R-250染色液染色1h，再經脫色液室溫
振蕩脫色直至透明條帶清晰；
所述洗脫液的組成為：由pH值為7.6、濃度為50mmol/LTris-HCl緩沖液、聚乙二醇辛
基苯基醚和CaCl₂組成，所含聚乙二醇辛基苯基醚的體積百分比為2.5％，CaCl₂的濃度為
5mmol/L；
所述漂洗液的組成為：由pH值為7.6、濃度為50mmol/LTris-HCl緩沖液和CaCl₂組成，
CaCl₂的濃度為5mmol/L；
所述孵育液的組成為：pH值為7.6、濃度為50mmol/LTris-HCl緩沖液、十二烷基聚乙
二醇醚、NaCl和CaCl₂，其中，十二烷基聚乙二醇醚的濃度為0.02％，NaCl的濃度為200mmol/
L,CaCl₂的濃度為5mmol/L；
所述考馬斯亮藍R-250染色液的組成為：1L考馬斯亮藍R-250染色液中含有1.0g考馬斯
亮藍R-250、450mL甲醇和100mL冰醋酸；
所述脫色液的組成為：1L脫色液中含有100mL無水甲醇和100mL冰乙酸；
所述電泳過程中所采用的凝膠由濃縮膠和分離膠組成，所述分離膠的組成為：pH值為
8.8、濃度為1.5mol/L的Tris-HCl緩沖液的體積百分比濃度為24.7％，質量體積比濃度為
30％的丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺凝膠貯液的混合物的體積百分比濃度為33.3％，質量體
積比濃度為10％的SDS水溶液的體積百分比濃度為1％，質量體積比濃度為10％的過硫酸銨
的水溶液的體積百分比濃度為1％，N,N,N',N'-四甲基乙二胺的體積百分比濃度為0.1％，
質量體積比濃度為1％的Ⅰ型膠原蛋白水溶液的體積百分比濃度為10％，余量為超純水；所
述濃縮膠的組成為：pH值為6.8、濃度為0.5mol/L的Tris-HCl緩沖液的體積百分比濃度為
25％,質量體積比濃度為30％的丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺凝膠貯液的混合物的體積百分
比濃度為16％，質量體積比濃度為10％的SDS水溶液的體積百分比濃度為1％，質量體積比
濃度為10％的過硫酸銨的水溶液的體積百分比濃度為0.5％，N,N,N',N'-四甲基乙二胺的
體積百分比濃度為0.1％，余量為超純水。