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一種檢測試劑盒及其應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-05
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201510948601.X 
  • 技術(專利)名稱 一種檢測試劑盒及其應用 
  • 項目單位 洛陽普萊柯萬泰生物技術有限公司
  • 發明人 田克恭,王瑩 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 馮驛瑤
  • 發布時間 2022-02-05  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供了含兩個抗豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體PEDV?McAB1、PEDV?McAB2、兩個豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體、兩個抗豬輪狀病毒單克隆抗體的檢測試劑盒,該試劑盒可用于非診斷目的豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒和/或豬輪狀病毒的同時檢測中的應用,并且同時檢測兩種或三種病毒的試劑盒的檢測靈敏度高于單獨檢測一種病毒的靈敏度,避免了假陽性結果。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種試劑盒,其中,所述試劑盒包括有效量的抗豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體PEDV-
    McAB1、PEDV-McAB2,以及用于檢測豬流行性腹瀉病毒抗原抗體反應的檢測試劑;有效量的
    抗豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體TGEV-McAB3、TGEV-McAB4,以及用于檢測豬傳染性胃腸
    炎病毒抗原抗體反應的檢測試劑;和/或與有效量的抗豬輪狀病毒單克隆抗體PoRV-McAB5、
    PoRV-McAB6,以及用于檢測豬輪狀病毒抗原抗體反應的檢測試劑;
    其中,所述單克隆抗體PEDV-McAB1重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID No.2,和輕鏈可
    變區的氨基酸序列為SEQ ID No.4,所述單克隆抗體PEDV-McAB2重鏈可變區的氨基酸序列
    為SEQ ID No.6,和輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID No.8;所述單克隆抗體PEDV-McAB1
    固定在支持介質上,所述單克隆抗體PEDV-McAB2溶解于反應液中;
    所述抗豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體TGEV-McAB3與TGEV-McAB4能同時與豬傳染性
    胃腸炎病毒產生抗原抗體結合反應,所述單克隆抗體TGEV-McAB3固定在支持介質上,所述
    單克隆抗體TGEV-McAB4溶解于反應液中;
    所述抗豬輪狀病毒單克隆抗體PoRV-McAB5和PoRV-McAB6能同時與豬輪狀病毒產生抗
    原抗體結合反應,所述單克隆抗體PoRV-McAB5固定在支持介質上,所述單克隆抗體PoRV-
    McAB6溶解于反應液中。
    2.根據權利要求1所述的試劑盒,其中,所述單克隆抗體PEDV-McAB1、PEDV-McAB2可以
    為嵌合單克隆抗體、改形單克隆抗體、豬源單克隆抗體。
    3.根據權利要求1所述的試劑盒,其中,所述單克隆抗體PEDV-McAB1、TGEV-McAB3和
    PoRV-McAB5含量為25-1000μg/ml,所述單克隆抗體PEDV-McAB2、TGEV-McAB4和PoRV-McAB6
    含量為50-2000μg/ml。
    4.根據權利要求1所述的試劑盒,其中,所述豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體TGEV-
    McAB3、TGEV-McAB4分別選自下列豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體TGEV-McAB3、TGEV-McAB4
    為C7C8B2、B5G8G7、E6D9A12、1A9、1G7、1H8、1B3、3C2、4A5、1G6、2F8、3E5、2D6、E10F10D5、4E2、
    8D2、4H4、5D6、4C3、9G1、5C6、2D7、4D6、6B10、7G7、JY(4)-1、JY(4)-2、JY(4)-3、2D6,且所述單
    克隆抗體TGEV-McAB3與TGEV-McAB4不同;
    所述豬輪狀病毒單克隆抗體PoRV-McAB5、PoRV-McAB6分別選自下列豬輪狀病毒單克隆
    抗體1D5、1B5、1G9、1C7、1F10、1D11、1F3、A6、G8、H4、4B4、4E6、4C5、5G2、1E5、1F4、2E2、2H11、
    4H2、4C8、4G8、5F6、4D11、2G9、6F5、2B3、1C11、C5D10、3B6,且所述單克隆抗體PoRV-McAB5與
    PoRV-McAB6不同。
    5.根據權利要求1所述的試劑盒,其中,所述單克隆抗體TGEV-McAB3為抗豬傳染性胃腸
    炎病毒單克隆抗體4E2,所述單克隆抗體TGEV-McAB4為抗豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體
    JY(4)-3;所述單克隆抗體PoRV-McAB5為抗豬輪狀病毒單克隆抗體G8,所述單克隆抗體
    PoRV-McAB6為抗豬輪狀病毒單克隆抗體A6。
    6.根據權利要求1所述的試劑盒,其中,所述支持介質為滴定板、磁顆粒、乳膠顆粒、硝
    酸纖維素膜中的任一種,所述用于檢測抗原抗體反應的檢測試劑可通過酶顯色、膠體金、熒
    光、化學發光中的任一種方法進行測定。
    7.一種試劑盒,其中,所述試劑盒包括有效量的單克隆抗體PEDV-McAB1、PEDV-McAB2,
    以及用于檢測豬流行性腹瀉病毒抗原抗體反應的檢測試劑;有效量的抗豬傳染性胃腸炎病
    毒單克隆抗體TGEV-McAB3、TGEV-McAB4,以及用于檢測豬傳染性胃腸炎病毒抗原抗體反應
    的檢測試劑;和/或與有效量的抗豬輪狀病毒單克隆抗體PoRV-McAB5、PoRV-McAB6,以及用
    于檢測豬輪狀病毒抗原抗體反應的檢測試劑;所述單克隆抗體PEDV-McAB1重鏈可變區的氨
    基酸序列為SEQ ID No.2,和輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID No.4,所述單克隆抗體
    PEDV-McAB2重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID No.6,和輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ
    ID No.8;
    其中,所述試劑盒包括膠體金檢測試紙條,所述膠體金檢測試紙條包括底板,所述底板
    具有第一端和第二端,并且沿所述第一端向第二端的方向上依次有濾紙、樣品墊、金標墊、
    硝酸纖維素膜和吸水墊,所述硝酸纖維素膜與金標墊接觸或與樣品墊、金標墊接觸使得抗
    原與所述單克隆抗體PEDV-McAB2的結合體、抗原與所述單克隆抗體TGEV-McAB4的結合體
    和/或抗原與所述單克隆抗體PoRV-McAB6的結合體能在其上向底板第二端遷移;所述金標
    墊上含有膠體金標記的所述單克隆抗體PEDV-McAB2、膠體金標記的所述單克隆抗體TGEV-
    McAB4和/或膠體金標記的單克隆抗體PoRV-McAB6,所述硝酸纖維素膜上包括兩條或三條檢
    測線和一條質控線,所述檢測線上分別固定化有所述單克隆抗體PEDV-McAB1、TGEV-McAB3
    和/或PoRV-McAB5,所述質控線上固定化有羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗。
    8.一種試劑盒,其中,所述試劑盒包括有效量的單克隆抗體PEDV-McAB1、PEDV-McAB2,
    以及用于檢測豬流行性腹瀉病毒抗原抗體反應的檢測試劑;有效量的抗豬傳染性胃腸炎病
    毒單克隆抗體TGEV-McAB3、TGEV-McAB4,以及用于檢測豬傳染性胃腸炎病毒抗原抗體反應
    的檢測試劑;和/或有效量的抗豬輪狀病毒單克隆抗體PoRV-McAB5、PoRV-McAB6,以及用于
    檢測豬輪狀病毒抗原抗體反應的檢測試劑;所述單克隆抗體PEDV-McAB1重鏈可變區的氨基
    酸序列為SEQ ID No.2,和輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID No.4,所述單克隆抗體PEDV-
    McAB2重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID No.6,和輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID
    No.8;
    其中,所述試劑盒包括緩沖液供應單元和酶免疫層析檢測試紙條;所述緩沖液供應單
    元用于將緩沖液供給所述酶免疫層析檢測試紙條;所述酶免疫層析檢測試紙條包括硝酸纖
    維素膜(1),所述酶免疫層析檢測試紙條在縱向上依次包括底物供應區、樣品供應區、檢測
    區;所述底物供應區包括底物墊(3),其上吸附有干燥的酶底物,所述底物墊(3)與硝酸纖維
    素膜(1)接觸,所述酶底物溶于緩沖液中并在硝酸纖維素膜(1)上向距所述緩沖液供應單元
    的遠端遷移;所述樣品供應區包括酶標墊(2),其上吸附有酶標記所述單克隆抗體PEDV-
    McAB2、酶標記所述單克隆抗體TGEV-McAB4和/或酶標記所述單克隆抗體PoRV-McAB6,所述
    酶底物能與所述單克隆抗體PEDV-McAB2、TGEV-McAB4和/或PoRV-McAB6上標記的酶產生顯
    色反應,所述酶標墊(2)與硝酸纖維素膜(1)接觸,所述單克隆抗體PEDV-McAB2、TGEV-McAB4
    和/或PoRV-McAB6溶于緩沖液中并在硝酸纖維素膜(1)上向距所述緩沖液供應單元的遠端
    遷移;以及所述檢測區上不同檢測線上分別固定化有所述單克隆抗體PEDV-McAB1、TGEV-
    McAB3和/或PoRV-McAB5;
    其中,所述緩沖液供應單元包括展開液墊(5)、底物緩沖液槽(8)、底物緩沖液(9)和緩
    沖液按鈕,所述底物緩沖液(9)放置于底物緩沖液槽(8)中,所述緩沖液按鈕位于底物緩沖
    液槽(8)的上方,按下可將所述展開液墊(5)浸入緩沖液(9)中;所述檢測區包括檢測線(6)、
    質控線(7),其中,所述質控線(7)較檢測線(6)更遠離所述樣品供應區,在所述檢測線(6)分
    別固定化有所述單克隆抗體PEDV-McAB1、TGEV-McAB3和/或PoRV-McAB5,在所述質控線(7)
    固定化有羊抗鼠多抗或羊抗鼠二抗,且吸附在酶標墊(2)上的酶標記所述單克隆抗體PEDV-
    McAB2、TGEV-McAB4和/或PoRV-McAB6分別相對于固定在檢測線(6)的固定所述單克隆抗體
    PEDV-McAB1、TGEV-McAB3和/或PoRV-McAB5而言是過量的;所述硝酸纖維素膜(1)全段粘附
    在支撐物(10)上,所述支撐物(10)連接所述緩沖液供應單元,底物供應區,樣品供應區,檢
    測區以及吸水墊(4),所述吸水墊(4)在距所述緩沖液供應單元的最遠端;以及檢測樣品
    (11)加入的位置為所述酶標墊(2)的位置。
    9.權利要求1~8中任一項所述的試劑盒在用于非診斷目的的豬流行性腹瀉病毒抗原、
    豬傳染性胃腸炎病毒抗原和/或豬輪狀病毒抗原檢測中的應用。
    10.根據權利要求9所述的應用,所述非診斷目的的檢測包括流行病學分析、對離體組
    織進行檢測、表位鑒定研究以及定性和定量鑒別檢驗含豬流行性腹瀉病毒抗原、豬傳染性
    胃腸炎病毒抗原和/或豬輪狀病毒抗原和其他抗原的疫苗組合物中的豬流行性腹瀉病毒抗
    原、豬傳染性胃腸炎病毒抗原和/或豬輪狀病毒抗原的檢測。
    展開

專利技術附圖

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