1.一種隱球菌活力檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒是用流式細胞學方法檢測腦脊
液、肺泡灌洗液中隱球菌活力和數量，該試劑盒包括下列試劑：
檢測液A：3.5％w/v的熒光增白劑，pH值為10；
檢測液B：1％w/v的核酸染色劑碘化丙啶；
稀釋液C：PBS稀釋緩沖液，pH值為7.2。
2.根據權利要求1所述的一種隱球菌活力檢測試劑盒，其特征在于，所述的檢測液A：
1.75mg熒光增白劑溶于0.5ml雙蒸水，NaOH調節pH至10，避光管保存。
3.根據權利要求1所述的一種隱球菌活力檢測試劑盒，其特征在于，所述的檢測液B：
0.5mg碘化丙啶溶于0.5ml雙蒸水中，避光保存。
4.根據權利要求1、2或3所述的一種隱球菌活力檢測試劑盒，其特征在于，所述的稀釋
液C：磷酸氫二鈉2.6g，磷酸二氫鈉0.43g，氯化鈉8.18g，定容到1000ml，調節pH至7.2。
5.根據權利要求4所述的一種隱球菌活力檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒，包
括：1ml的檢測液A、1ml的檢測液B和50ml的稀釋液C。
6.一種利用權利要求1所述的隱球菌活力檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，該方法
包括如下步驟：
A、將含隱球菌的樣本懸液離心1000轉/分鐘，5分鐘，去上清；用稀釋液C將沉淀稀釋至
106個/ml，制成待測標本；
B、將待測標本振蕩后進行流式細胞檢測調零，調零后的標本中加入檢測液A，上機檢
測，并進行圈門；
C、在步驟B的樣本中加入檢測液B，再次上機檢測，至少記錄10000個細胞并加以記錄和
統計分析。
7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述的步驟B中采用FL1和FL4通道檢
測熒光。
8.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述的步驟C獲得流式細胞數據，用
Flowjo分析軟件，在PI_Cy5-A/VioBlue-A雙參數點圖中進行設門調整。
9.一種利用權利要求1所述的隱球菌活力檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，該方法
包括下述步驟：
步驟一試劑制備：
1.1、檢測液A為3.5％w/v的熒光增白劑保存液：1.75mg熒光增白劑溶于0.5ml雙蒸水，
NaOH調節pH至10，避光管保存；
1.2、檢測液B為1％w/v的碘化丙啶保存液：0.5mg碘化丙啶溶于0.5ml雙蒸水中，避光管
保存；
1.3、稀釋液C為：磷酸氫二鈉2.6g，磷酸二氫鈉0.43g，氯化鈉8.18g，定容到1000ml，調
節pH至7.2，取50ml分裝；
步驟二樣本標記與檢測：
將腦脊液樣本1000轉/分離心5分鐘，棄上清液，加入1.3中稀釋液C200μl，重懸，制成待
測標本；
步驟三采用流式細胞儀進行檢測：
按照流式細胞儀的操作規程，對步驟二中制備的待測標本進行測試，并用Flowjo分析
軟件進行數據分析，
3.1將重懸的待測標本振蕩后進行流式細胞檢測，采用二維點圖形式進行結果分析：先
建立FSC/SSC點圖，排除細胞碎片，選取R1區；
3.2在3.1的樣本中加入5μl檢測液A，再次上機檢測，吸樣量為50μl，FL1-A/FL4-A雙通
道檢測；
3.3在3.2的樣本中加入5μl檢測液B，再次上機檢測，獲得流式細胞數據，用Flowjo分析
軟件，在PI_Cy5-A/VioBlue-A雙參數點圖中進行調整。
展開
