本發明涉及一種一步法進行人血清、體液或組織勻漿中透明質酸含量檢測的化學發光法試劑盒，屬免疫分析醫學范疇。其采用固相包被及間接標記酶技術，從根本上解決了透明質酸試劑盒不能一步法檢測的難題，可以讓操作更方便，讓檢測更準確，讓試劑更穩定。本發明試劑盒包括有校準品；包被板；酶結合物和化學發光底物液A和B。試劑盒中HA校準品和酶結合物的加樣量均為50μl，一步法，反應時間1小時。通過嚴謹的方法學鑒定，確定了科學合理的正常值范圍，并對臨床測值結果與放免法試劑盒進行統計學比較，表明試劑盒具備靈敏度高，測值準確，重復性好，試劑穩定等諸多技術優點，值得市場的大力推廣和應用。

1.一種一步法檢測透明質酸的化學發光試劑盒，其特征在于試劑盒包括：透
明質酸校準品、包被有與牛血清白蛋白偶聯的透明質酸的包被板、由透明質酸結
合蛋白和辣根過氧化物酶標記的透明質酸結合蛋白抗體分別按體積比1∶2000和
1∶6500稀釋到酶稀釋液中，經過4℃20小時二者充分反應后配制而成的透明質
酸酶結合物、包含6mmol/L過氧化氫，50mmol/L?pH7.1Tris-HCL緩沖液的化
學發光底物液A和包含4mmol/L魯米諾，1.2mmol/L對碘苯酚，50mmol/L?
pH8.6Tris-HCl緩沖液的化學發光底物液B，所述酶稀釋液含50mmol/L?PB，0.25％
牛血清白蛋白，10％丙三醇。
2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的透明質酸-牛血清白蛋白
按照如下方法制備：準確稱取5mg透明質酸抗原，溶解于2ml?0.1mol/L?pH?5.6
磷酸鹽緩沖液加10mg牛血清白蛋白，溶解后加5mg?1-乙基-3-(3-二甲基氨
基丙基)-碳二亞胺4℃反應17-20小時，裝入透析袋于1000ml?0.01mol/L?
pH7.4PB中透析，換液4次，取出凍存于-15℃以下備用。
3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的透明質酸結合蛋白抗體
的制備方法如下：采用常規免疫法將透明質酸結合蛋白按照0.5mg/kg的免疫劑
量融合完全佐劑多點注射到大耳白實驗用兔子的背部皮下，間隔15天后相同方
法、相同免疫劑量注射透明質酸結合蛋白融合的不完全佐劑，共免疫5次，頸
動脈取血，分離出血清，測定血清滴度，硫酸銨2次分級沉淀得到兔IgG，透析
于2000ml?50mmol/L?pH7.4PB緩沖液中過夜，透析4次后取出，凍存于-15℃
以下備用。
4.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述酶結合物中酶標記透明質
酸結合蛋白抗體的制備方法如下：采用改良高碘酸鈉氧化法將透明質酸結合蛋
白抗體與辣根過氧化物酶聯結：稱取5mg辣根過氧化物酶溶解于1ml蒸餾水中，
加入0.2ml新配的0.1mol/L高碘酸鈉溶液，室溫下避光攪拌20分鐘，將上述
溶液裝入透析袋中，用1mmol/L?pH4.4的醋酸鈉緩沖液透析，4℃過夜，加20
μl?0.2mol/L?pH9.5碳酸鹽緩沖液，使以上醛化辣根過氧化物酶的pH值升
高到9.0～9.5，然后立即加入10mg透明質酸結合蛋白抗體在1ml?0.01M碳酸鹽
緩沖液中，室溫避光輕輕攪拌2小時，加0.1ml新配的4mg/ml硼氫化鈉液，
混勻，再置4℃2小時，將上述液裝入透析袋中，用0.15mol/L?pH7.4PB
透析，4℃過夜。