乙肝5項化學發光檢測試劑盒及其制備方法，涉及一種用于乙肝檢測的試劑盒。試劑盒，包括包被的微孔反應板、生物素標記物、堿性磷酸酶標記物、中和試劑、校準品、發光底物液和濃縮清洗液。分別制備鏈霉親和素預包被反應板、校準品系列、生物素標記物、堿性磷酸酶標記物、中和試劑、發光底物液、濃縮清洗液，組裝乙肝5項化學發光定量檢測試劑盒。制備的乙肝5項化學發光檢測試劑盒不僅可以靈敏檢測出乙肝5項，并且可以對其進行精確的定量鑒定，價格便宜，操作簡單，結果準確，環保無污染，具有長遠的好處。

1.乙肝5項化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于所述乙肝5項化學發光檢測試劑盒包括包被的微孔反應板、生物素標記物、堿性磷酸酶標記物、中和試劑、校準品、發光底物液和濃縮清洗液；所述生物素標記物共有5種生物素標記物，分別為生物素標記的乙肝表面抗體、生物素標記的乙肝表面抗原、生物素標記的乙肝e抗體1、生物素標記的乙肝e抗體2和生物素標記的乙肝核心抗原，所述生物素標記的乙肝e抗體1和生物素標記的乙肝e抗體2的分子成份相同，工作濃度不同，所述生物素標記的乙肝e抗體1用于乙肝e抗原檢測，生物素標記的乙肝e抗體2用于乙肝e抗體檢測；所述堿性磷酸酶標記物共有5種堿性磷酸酶標記物，分別為乙肝表面抗體堿性磷酸酶標記物、乙肝表面抗原堿性磷酸酶標記物，乙肝e抗體堿性磷酸酶標記物1，乙肝e抗體堿性磷酸酶標記物2和乙肝核心抗體堿性磷酸酶標記物，所述堿性磷酸酶標記的乙肝e抗體1和堿性磷酸酶標記的乙肝e抗體2的分子成份相同，工作濃度不同，所述堿性磷酸酶標記的乙肝e抗體1用乙肝e抗原檢測，堿性磷酸酶標記的乙肝e抗體2用于乙肝e抗體檢測；所述中和試劑為中和試劑乙肝e抗原；所述校準品包括乙肝病毒表面抗原校準品、乙肝病毒表面抗體校準品、乙肝病毒e抗原校準品、乙肝病毒e抗體校準品和乙肝病毒核心抗體校準品共5種校準品，其中乙肝病毒表面抗原校準品的濃度包括200ng/mL、100ng/mL、25ng/mL、2ng/mL、0.1ng/mL、0ng/mL共6個濃度，乙肝病毒表面抗體校準品的濃度包括1000mIU/mL、500mIU/mL、200mIU/mL、50mIU/mL、10mIU/mL、0mIU/mL共6個濃度，乙肝病毒e抗原校準品的濃度包括40NCU/mL、10NCU/mL、2NCU/mL、0.5NCU/mL、0.1NCU/mL、0NCU/mL共6個濃度，乙肝病毒e抗體校準品的濃度包括0.4NCU/mL、1NCU/mL、2.5NCU/mL、6NCU/mL、12NCU/mL、0NCU/mL共6個濃度，乙肝病毒核心抗體校準品的濃度包括4.5NCU/mL、9NCU/mL、18NCU/mL、36NCU/mL、96NCU/mL、0NCU/mL共6個濃度；所述制備方法，包括以下步驟：1)制備鏈霉親和素預包被反應板鏈霉親和素用包被緩沖液稀釋，取反應板，將稀釋的鏈霉親和素加入反應板中，預包被后，甩去包被緩沖液，再加入封板緩沖液，置37℃恒溫放置2h，去掉封板緩沖液，烘干后，加干燥劑密封，得鏈霉親和素預包被反應板；2)制備校準品系列(1)配制乙肝表面抗原校準品將高值乙肝表面抗原用校準品稀釋液稀釋，用國家標準品重復標定3次，3次標定值，取均值作為標定的乙肝表面抗原濃度，所述校準品稀釋液由0.05mmol/L的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、0.01mmol/L的氯化鈉的1％的牛血清白蛋白及10％新生牛血清組成，pH值7.4，乙肝表面抗原作標準品濃度系列200ng/mL、100ng/mL、25ng/mL、2ng/mL、0.1ng/mL、0ng/mL，分裝成0.5mL/瓶，2～8℃或－20℃存放備用；(2)配制乙肝表面抗體校準品同乙肝表面抗原的配制，其中校準品系列工作濃度為1000mIU/mL、500mIU/mL、200mIU/mL、50mIU/mL、10mIU/mL、0mIU/mL；(3)配制乙肝e抗原校準品同乙肝表面抗原的配制，其中校準品系列工作濃度為40NCU/mL、10NCU/mL、2NCU/mL、0.5NCU/mL、0.1NCU/mL、0NCU/mL；(4)配制乙肝e抗體校準品同乙肝表面抗原的配制，其中校準品系列工作濃度為0.4NCU/mL、1NCU/mL、2.5NCU/mL、6NCU/mL、12NCU/mL、0NCU/mL；(5)配制乙肝核心抗體校準品同乙肝表面抗原的配制，其中校準品系列工作濃度為4.5NCU/mL、9NCU/mL、18NCU/mL、36NCU/mL、96NCU/mL、0NCU/mL；3)制備生物素標記物(1)制備乙肝表面抗體生物素標記物將1mg乙肝表面抗體溶于0.1mol/L，pH8.8的硼酸鹽緩沖液0.5ml配成濃度為2mg/ml乙肝表面抗體溶液中，將生物素用二甲亞砜配制成濃度為1mg/ml生物素溶液，按照30～80μg/mg的比率，將生物素加入到乙肝表面抗體溶液中，避光振蕩反應4h，10℃，按照每250μg生物素加20μL的量，加入新鮮配制1mol/L的NH₄Cl溶液，避光震蕩反應10min后，用PBS避光透析過夜，根據終體積計算抗體的濃度，加入甘油制備乙肝表面抗體生物素標記物；(2)制備乙肝表面抗原生物素標記物、乙肝e抗體生物素標記物和乙肝核心抗原生物素標記物方法同步驟(1)乙肝表面抗體生物素標記物的制備，所不同的是乙肝表面抗原的濃度為4mg/ml，乙肝e抗體的濃度為1mg/ml，乙肝核心抗原的濃度為0.5mg/ml；4)制備堿性磷酸酶標記物(1)制備乙肝表面抗原堿性磷酸酶標記物采用改良過碘酸鈉-乙二醇法進行乙肝表面抗原堿性磷酸酶標記，將獲得的乙肝表面抗原堿性磷酸酶標記物用含100g/L小牛血清的0.05mol/L?TBS緩沖液按1∶1000稀釋成工作液，保存于－20℃，小牛血清的pH為7.5；(2)制備乙肝表面抗體堿性磷酸酶標記物、乙肝e抗體1堿性磷酸酶標記物、乙肝e抗體2堿性磷酸酶標記物和乙肝核心抗體堿性磷酸酶標記物方法同步驟(1)乙肝表面抗原堿性磷酸酶標記物的制備；5)制備中和試劑將乙肝e抗原配制成1mg/ml濃度作為中和試劑乙肝e抗原；6)制備發光底物液取底物稀釋緩沖液450mL，增強劑為10×50mL，1mol/L?MgCl₂500μL，加發光底物金剛烷胺衍生物CSPD?8000μL于滅活容器中，振蕩混勻，避光，密封2～8℃保存，得發光底物液508.5mL；7)制備濃縮清洗液配制0.01mol/L磷酸鹽緩沖液1000mL，加20mL的吐溫-20作為濃縮清洗液，磷酸鹽緩沖液的pH為7.4；8)組裝乙肝5項化學發光定量檢測試劑盒將包被微孔反應板、生物素標記物、堿性磷酸酶標記物、中和試劑、校準品、發光底物液、濃縮清洗液組裝成乙肝5項化學發光定量檢測試劑盒。2.如權利要求1所述乙肝5項化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于所述微孔反應板的材料為聚苯乙烯。3.如權利要求1所述乙肝5項化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述包被緩沖液為pH9.6、50mmol/L的Na₂CO₃-NaHCO₃緩沖溶液，所述鏈霉親和素稀釋濃度為8μg/mL。4.如權利要求1所述乙肝5項化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述稀釋的鏈霉親和素的加入量為每反應板150μL。5.如權利要求1所述乙肝5項化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述預包被的條件是置37℃恒溫放置2h進行預包被。6.如權利要求1所述乙肝5項化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述封板緩沖液的加入量為每反應板加入150μL封板緩沖液。7.如權利要求1所述乙肝5項化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述烘干的條件是于37℃干燥室烘干2h。8.如權利要求1所述乙肝5項化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述封板緩沖液為0.01mol/L?TBS-T再加上1％BSA、0.2％明膠。9.如權利要求1所述乙肝5項化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述干燥室的相對濕度小于30％。10.如權利要求1所述乙肝5項化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟6)中，所述底物稀釋緩沖液為0.05mol/L?Tris-HCl，pH9.5。