1.一種用于肺炎支原體基因分型的質譜模型的制備方法，其特
征在于，包括以下步驟：
1)分別提取肺炎支原體基因1型、2型的蛋白樣品：收集液體
培養至對數生長期的肺炎支原體基因1型、2型菌株，離心，棄上清；
將沉淀用蛋白洗滌液A洗滌，離心，棄上清；沉淀菌體用蛋白洗滌
液B和C混勻后洗滌，高速離心，棄上層蛋白洗滌液；將菌體沉淀
加入蛋白提取液A和B進行抽提，高速離心，取上層液體；
2)將基因1型和2型的肺炎支原體蛋白樣品分別上質譜儀，同
時設陰性對照，對蛋白質指紋圖譜進行標準化處理；
3)采集2000-20000Da范圍內的肽圖譜；對所得數據進行統計學
處理，肺炎支原體基因1型特征蛋白分子量分別為：2190.59，2798.57，
2970.91，3073.09，3102.52，3166.09，3245.77，3297.86，3335.11，
3384.04，4143.83，4323.90，4386.72，4715.60，4797.05，4918.58，
4952.92，5392.83，5601.63，5625.51，6149.45，6213.71，6596.82，
6773.16，6798.83，9837.83，9901.70
肺炎支原體基因2型特征蛋白分子量為：2191.52，2468.44，
2799.14，2970.91，3073.91，3102.29，3164.36，3215.28，3384.69，
3695.94，4142.42，4386.80，4439.41，4482.32，4511.86，4715.77，
4907.63，4953.18，5091.91，5390.40，5601.78，5624.20，6149.11，
6212.89，6430.88，6490.60，6773.28，6798.98，8877.41，8964.03，
9812.26，9902.45；上述分子量單位為Da；
其中，步驟1)所述蛋白洗滌液A配方為磷酸二氫鉀0.2g，磷酸氫
二鈉2.9g，氯化鈉8.0g，氯化鉀0.2g，吐溫-200.5mL，加水至1000ml，
使用鹽酸調節pH值為7.4，高壓滅菌；所述蛋白洗滌液B為18.3兆歐超
純水，所述蛋白洗滌液C為100％質譜級乙醇；所述蛋白提取液A為70％
質譜級甲酸，所述蛋白提取液B為乙腈。
2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中所述
的離心，其參數為12000g，5min；所述的高速離心，其參數為16000g，
5min。
3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中將肺
炎支原體蛋白樣品加入質譜樣本靶上，50-70s后，按體積比1:1在樣
品上覆蓋基質，干燥后上質譜儀進行質譜分析；所述基質為α-氰基
-4羥基肉桂酸在基質溶解液中的飽和溶液，基質溶解液：50％18.3兆
歐超純水，50％乙腈，2.5％三氟乙酸。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述標準化
處理是通過設定以下質譜數據庫搜索參數來實現的：譜圖校正頻率臨
界值:50；分值計算頻率臨界值:5；原始譜圖最大質量偏差:2000；校
正譜圖質量容忍度:250；單峰質量偏差限:600；強度校正參數:0.25。
5.用于肺炎支原體基因型分型的試劑盒，其特征在于，含有：
1)蛋白洗滌液A：其1L配方為磷酸二氫鉀0.2g，磷酸氫二鈉2.9g，
氯化鈉8.0g，氯化鉀0.2g，吐溫-200.5mL，加水至1000ml，使用鹽酸
調節pH值為7.4，高壓滅菌；
2)蛋白洗滌液B為18.3兆歐超純水；
3)蛋白洗滌液C為100％質譜級乙醇；
4)蛋白提取液A為70％質譜級甲酸；
5)蛋白提取液B為乙腈；
6)基質：α-氰基-4羥基肉桂酸，基質溶解液：50％18.3兆歐超
純水，50％乙腈，0.1％-3％三氟乙酸；
7)含有以下兩組肺炎支原體特征蛋白的圖譜，
1)27個特征蛋白，其分別為:分子量2190.59，2798.57，2970.91，
3073.09，3102.52，3166.09，3245.77，3297.86，3335.11，3384.04，
4143.83，4323.90，4386.72，4715.60，4797.05，4918.58，4952.92，
5392.83，5601.63，5625.51，6149.45，6213.71，6596.82，6773.16，
6798.83，9837.83，9901.70；
2)32個特征蛋白，其分別為:分子量2191.52，2468.44，2799.14，
2970.91，3073.91，3102.29，3164.36，3215.28，3384.69，3695.94，
4142.42，4386.80，4439.41，4482.32，4511.86，4715.77，4907.63，
4953.18，5091.91，5390.40，5601.78，5624.20，6149.11，6212.89，
6430.88，6490.60，6773.28，6798.98，8877.41，8964.03，9812.26，
9902.45；上述分子量單位為Da。
6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，還有肺炎支原體基
因1型、2型的蛋白樣品作為陽性對照。
7.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，其工作步驟為：
1)提取待測菌體蛋白樣品：收集液體培養至對數生長期的菌株，
離心，棄上清；將沉淀用蛋白洗滌液A洗滌，離心，棄上清；沉淀
菌體用蛋白洗滌液B和C混勻后洗滌，高速離心，棄上層蛋白洗滌
液；將菌體沉淀加入蛋白提取液A和B進行抽提，高速離心，取上
層液體；
2)將待測菌體蛋白樣品分別上質譜儀，對蛋白質指紋圖譜進行
標準化處理；
3)采集數據，對所得數據進行統計學處理，若指紋圖譜峰圖中
出現下列至少70％數量的特征蛋白，則待測菌為肺炎支原體基因1
型；所述特征蛋白分子量為2190.59，2798.57，2970.91，3073.09，
3102.52，3166.09，3245.77，3297.86，3335.11，3384.04，4143.83，
4323.90，4386.72，4715.60，4797.05，4918.58，4952.92，5392.83，
5601.63，5625.51，6149.45，6213.71，6596.82，6773.16，6798.83，
9837.83和9901.70Da的多肽；
若指紋圖譜峰圖中出現下列至少70％數量的特征蛋白，則待測菌
為肺炎支原體為基因2型，所述特征蛋白分子量為2191.52，2468.44，
2799.14，2970.91，3073.91，3102.29，3164.36，3215.28，3384.69，
3695.94，4142.42，4386.80，4439.41，4482.32，4511.86，4715.77，
4907.63，4953.18，5091.91，5390.40，5601.78，5624.20，6149.11，
6212.89，6430.88，6490.60，6773.28，6798.98，8877.41，8964.03，
9812.26和9902.45Da的多肽。
8.如權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，步驟2)所述標準
化處理是通過設定以下質譜數據庫搜索參數來實現的：譜圖校正頻率
臨界值:50；分值計算頻率臨界值:5；原始譜圖最大質量偏差:2000；
校正譜圖質量容忍度:250；單峰質量偏差限:600；強度校正參
數:0.25。
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