1.一種制備透明質酸化學發光定量測定試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟：
1)配制透明質酸校準品；
2)將透明質酸連接到巰基磁珠上制備連接物，用磁珠緩沖液稀釋連接物到一定濃度，制備出連接物
試劑；
3)用酶標記透明質酸結合蛋白，制備酶結合物；
4)配制化學發光底物；
5)配制清洗液；
6)分裝以上各試劑，組成成品；
所述連接物試劑的制備過程包括以下步驟：
a1、準確稱取透明質酸5mg，溶解于純水中，終濃度為0.5mg/ml；
a2、在上一步的透明質酸溶液中加入1M?NaOH溶液使溶液pH達到10±0.1，室溫水解8-10小時，將
透明質酸分子中的酰胺基進行水解，使其暴露出伯氨基(-NH2)基團，反應過程中充分混勻；
a3、將反應后的透明質酸溶液用透析袋透析2小時，除去溶液中的NaOH，然后濃縮至約2mg/ml；
a4、按照如下方法配制pH＝7.0的50mmol/l的磷酸鹽緩沖液：稱取NaH2PO4·H2O?2.69g，Na2HPO4·2H20
5.43g，NaCl?5.85g，加入800ml純化水，用1M鹽酸或氫氧化鈉將pH值調節至7.0±0.1，定容至1000ml
后復測pH值，使之處于7.0±0.1，0.22μm過濾后于2-8℃保存；
a5、配制10mg/ml的磺基琥珀酰亞胺4-[N-甲基馬來酸]-1-羧環己烷(SMCC)，用二甲基亞砜(DMSO)
溶解；
a6、將濃縮后的透明質酸溶液中加入50μl?10mg/ml的磺基琥珀酰亞胺4-[N-甲基馬來酸]-1-羧環己
烷(SMCC)進行活化，室溫反應30分鐘，反應過程中充分混勻；
a7、量取5mg巰基磁珠，將巰基磁珠放置于磁架上靜置2分鐘，移除上清，用pH＝7.0的50mmol/l磷
酸鹽緩沖液洗滌三次后加入磷酸鹽緩沖液保存，使磁珠濃度為25mg/ml；
a8、將活化后的透明質酸溶液加入清洗后的巰基磁珠中，并將反應液中磁珠濃度調整為2mg/ml，室
溫反應30分鐘，反應過程中充分混勻；
a9、按照如下方法配制磁珠緩沖液：稱取Tris堿12.11g，NaCl?8.78g，0.5ml吐溫-20，1g疊氮鈉，
加入800ml純化水，用4mol/l鹽酸將pH值調節至7.4±0.1，加入1g干酪素鈉，定容至1000ml后復測
pH值，使之處于7.4±0.1，0.22μm過濾后于2-8℃保存；
a10、反應完成后移除上清，用50mmol/l磷酸鹽緩沖液洗滌三次后加入1ml磁珠緩沖液進行保存，使
用時用磁珠緩沖液稀釋100倍即為工作液，濃度為0.05mg/ml。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶結合物的制備過程包括以下步驟：
b1、取堿性磷酸酶0.5mg，將濃度調整為5mg/ml；
b2、稱取2mg磺基琥珀酰亞胺4-[N-甲基馬來酸]-1-羧環己烷(SMCC)，用二甲基亞砜(DMSO)進行
溶解，終濃度為10mg/ml，加入5μl至堿性磷酸酶溶液中，17-23℃反應20分鐘；
b3、用分子篩層析法根據分子量的差別對反應混合物進行純化，收集活化后的堿性磷酸酶溶液；
b4、取純品HABP?0.5mg，加入到活化后的堿性磷酸酶溶液中，2-8℃反應4小時，最后用分子篩層析
法將酶標記的HABP提純出來；
b5、酶結合物緩沖液配制：稱取Tris12.11g，NaCl?8.78g，5g甘油，1g疊氮鈉，加入800ml純化水，
用4mol/l鹽酸將pH值調節至7.4±0.1，加入10gBSA，定容至1000ml后復測pH值，使之處于7.4±0.1，
0.22μm過濾后于2-8℃保存；
b6、將結合物用酶結合物緩沖液稀釋至酶標記的透明質酸結合蛋白濃度為1μg/ml即為工作液。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述化學發光底物的配制包括以下步驟：
準確稱取AMPPD(3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1，2-二氧環乙烷二鈉鹽)1g，Tris
24g，氯化鈉160g，CTAC?0.0255g，純化水定溶至1000ml，調整化學發光底物溶液pH值為9.7±0.05。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述校準品的制備過程包括以下步驟：
c1、校準品緩沖液的配制：
稱取Tris堿6.06g，NaCl?8.78g，1g疊氮鈉，加入800ml純化水，用4mol/l鹽酸將pH值調節至
7.0±0.1，加入5g?BSA，定容至1000ml后復測pH值，使之處于7.0±0.1，0.22μm過濾后于2-8℃保存；
c2、將HA純品粉末用校準品緩沖液溶解，配制成為100μg/ml的濃溶液，隨后依次稀釋出5個濃度，
分別為：20，80，320，640，1600ng/ml，加上0點，共6個濃度的校準品梯度值。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述清洗液的制備過程包括以下步驟：
稱取Tris?1211.4mg，NaCl?9g，吐溫-20?1g，加入純化水約900ml，混勻至各試劑溶解，用1M鹽酸溶液
調整溶液pH值到8.0±0.1，補加純化水定容至1000ml，過濾后混勻待用。
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