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一種牛口蹄疫3ABC抗體化學發光檢測試劑盒

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-21
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201611052512.8 
  • 技術(專利)名稱 一種??谔阋?ABC抗體化學發光檢測試劑盒 
  • 項目單位 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
  • 發明人 ?;菔|,劉澤眾,邵軍軍,趙付榮,李秀梅,張永光 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 沈世開
  • 發布時間 2021-12-21  
  • 01

    項目簡介

    一種??谔阋?ABC抗體化學發光檢測試劑盒,屬免疫學檢測領域,所述檢測試劑盒包含96孔化學發光免疫分析板、酶標抗體、血清稀釋液、化學發光底物、化學發光增強劑和PBST洗滌液,其中所述96孔化學發光免疫分析板包被3ABC融合蛋白;酶標抗體為辣根過氧化物酶標記兔抗牛lgG抗體;血清稀釋液包含0.01% Tween?20、1%酪蛋白、10%馬血清和1%大腸桿菌;所述化學發光底物為魯米諾溶液;所述化學發光增強劑含有IPP、HO和Tween?20。本發明所述試劑盒相對于市售試劑盒產品,敏感性更高,特異性更強,診斷能力亦優于其他產品。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種牛口蹄疫3ABC抗體化學發光檢測試劑盒,所述檢測試劑盒包含96孔化學發光免
    疫分析板、酶標抗體、血清稀釋液、化學發光底物、化學發光增強劑和PBST洗滌液,其特征在
    于:所述96孔化學發光免疫分析板包被3ABC融合蛋白,所述3ABC融合蛋白的氨基酸序列如
    SEQ ID NO:2所示;所述酶標抗體為辣根過氧化物酶標記的兔抗牛lgG抗體;所述血清稀釋
    液為pH=7.2~7.4且摩爾濃度為10mmol/L的磷酸鹽緩沖液,其中包含體積分數為 0.01% 的
    Tween-20、質量體積百分數為1%的酪蛋白、體積分數為10%的馬血清和體積分數為1%的大腸
    桿菌裂解液;所述化學發光底物為0.1mmol/L 的魯米諾溶液;所述化學發光增強劑包含
    0.07 mmol/L的IPP、3mmol/L的H2O2和體積分數為0.002%的Tween-20;
    所述3ABC融合蛋白的制備方法,包括以下步驟:
    步驟一、利用基因定點突變技術,獲取突變后的3ABC基因,使其編碼的3ABC蛋白中3C蛋
    白上的第46位組氨酸突變成酪氨酸和第163位半胱氨酸突變成甘氨酸;所述3ABC基因的核
    苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;
    步驟二、將步驟一獲取的3ABC基因和載體 PproExHtB 均用限制性內切酶 BamHI與
    XhoI雙酶切后進行連接,將突變后的全長3ABC基因插入線性化的重組表達質粒構建重組表
    達質粒PproExhTB-mu3ABC,鑒定陽性后保存備用;
    步驟三、將步驟二所得陽性重組表達質粒PproExhTB-mu3ABC轉化大腸桿菌Rosetta
    (DE3),獲取重組大腸桿菌,將重組大腸桿菌接種到培養基上,待OD600=0.4-0.6時,向培養基
    中加入IPTG,在16℃、220rpm條件下處理20h進行誘導表達,經離心、裂解,溶解包涵體,純化
    蛋白,得3ABC融合蛋白。
    2.如權利要求1所述的一種??谔阋?ABC抗體化學發光檢測試劑盒,其特征在于:所述
    3ABC融合蛋白的包被濃度為250ng/mL。
    3.如權利要求1所述的一種??谔阋?ABC抗體化學發光檢測試劑盒,其特征在于:所述
    大腸桿菌裂解液是將未經轉化的大腸桿菌Rosetta(DE3)培養至對數期,離心,得菌體沉淀;
    加入與菌體沉淀等體積的裂解緩沖液,混勻,得混合物;向混合物中加入其1/3體積的直徑
    為0.22μm的玻璃珠,震蕩,離心,取上清,得大腸桿菌裂解液。
    4.如權利要求3所述的一種牛口蹄疫3ABC抗體化學發光檢測試劑盒,其特征在于:所述
    裂解緩沖液由以下成分組成:體積分數為2% 的Triton X-100;體積分數為1%的SDS;
    100mmol/L的NaCl;10mmol/L,pH=8.0的Tris-HCl;1 mmol/L,pH=8.0的 EDTA;余量為水。
    5.如權利要求1所述的一種牛口蹄疫3ABC抗體化學發光檢測試劑盒,其特征在于:所述
    3ABC基因的獲取過程為:從感染口蹄疫病毒的牛的水皰液中提取總RNA,逆轉錄合成cDNA;
    設計六組引物,以合成的cDNA為模板,首先利用引物3ABC-F 和3C-46-R 擴增第一段基因;
    然后利用3C-46-F和3C-163-R擴增第二段基因;再用3C-163-F與3ABC-R擴增第三段基因;最
    后通過融合PCR將擴增的三段基因融合成突變后的3ABC基因;
    所述引物序列如下:
    3ABC-F:5'-CGGGATCC ATCTCAATTCCTTCCCAAAAGTCC-3'
    3ABC-R:5'-CCGCTCGAGT CTCATGGTGTGGTTCGGGGT-3'
    3C-46-F:5'-CGTACCTCGTTACCTTTTCGC-3’
    3C-46-R:5'-GCGAAAAGGTAACGAGGTACG-3’
    3C-163-F:5'-AGGCTACGGTGGGGGAGC-3'
    3C-163-R:5'-GCTCCCCCACCGTAGCCT-3'。
    展開

專利技術附圖

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