本發明公開了一種檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒及其檢測方法和應用，屬于體外診斷檢測技術領域。該試劑盒包括以下組分：1)磁性微球體系：包括直接連接或間接連接抗HBsAg抗體1的磁性微球；2)第一標記物體系：包括直接連接或間接連接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的抗HBsAg抗體2；3)第二標記物體系：包括直接連接或間接連接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的抗HBsAg抗體2，或者包括直接連接或間接連接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的抗HBsAg抗體3。采用本發明的試劑盒和檢測方法來檢測乙肝病毒表面抗原，具有靈敏度高和不會產生HOOK效應的優點。

1.一種檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，包括以下組分：
1)磁性微球體系：包括有直接連接或間接連接抗HBsAg抗體1的磁性微球；
2)第一標記物體系：包括有直接連接或間接連接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的
抗HBsAg抗體2；
3)第二標記物體系：包括有直接連接或間接連接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的
抗HBsAg抗體2，或者包括有直接連接或間接連接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的抗
HBsAg抗體3；
所述標記示蹤物為發光標記物，選自：魯米諾及其衍生物，異魯米諾及其衍生物；
所述抗HBsAg抗體1、抗HBsAg抗體2和抗HBsAg抗體3的抗體位點互不相同；
所述抗HBsAg抗體1為單克隆抗體，所述抗HBsAg抗體2為多克隆抗體；
所述第一標記物體系和第二標記物體系中所用的標記示蹤物相同。
2.根據權利要求1所述的檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，所述第一標記
物體系中所用的抗HBsAg抗體，和第二標記物體系中所用的抗HBsAg抗體相同。
3.根據權利要求1所述的檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，所述1)磁性微
球體系中，所述間接連接抗HBsAg抗體1的磁性微球由包被鏈霉親和素的磁性微球，和標記
生物素的抗HBsAg抗體1組成；或所述間接連接抗HBsAg抗體1的磁性微球由包被抗FITC抗體
的磁性微球，和標記FITC的抗HBsAg抗體1組成。
4.根據權利要求1所述的檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，所述2)第一標
記物體系中：所述間接連接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的抗HBsAg抗體2由標記生物
素的抗HBsAg抗體2，和標記鏈霉親和素的第一標記示蹤物或第二標記示蹤物組成；或所述
間接連接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的抗HBsAg抗體2由標記FITC的抗HBsAg抗體2，
和標記抗FITC抗體的第一標記示蹤物或第二標記示蹤物組成。
5.根據權利要求1所述的檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，所述3)第二標
記物體系中：所述間接連接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的抗HBsAg抗體2由標記生物
素的抗HBsAg抗體2，和標記鏈霉親和素的第一標記示蹤物或第二標記示蹤物組成；或所述
間接連接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的抗HBsAg抗體2由標記FITC的抗HBsAg抗體2，
和標記抗FITC抗體的第一標記示蹤物或第二標記示蹤物組成；
所述間接連接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的抗HBsAg抗體3由標記生物素的抗
HBsAg抗體3，和標記鏈霉親和素的第一標記示蹤物或第二標記示蹤物組成；或所述間接連
接第一標記示蹤物或第二標記示蹤物的抗HBsAg抗體3由標記FITC的抗HBsAg抗體3，和標記
抗FITC抗體的第一標記示蹤物或第二標記示蹤物組成。
6.根據權利要求1所述的檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，按照以下步驟
使用：
1)一次加樣：將待測樣本與第一標記物體系和磁性微球體系混合，溫育，形成復合物；
2)清洗：外加磁場將上述反應產物沉淀，去除上清液，并以緩沖液清洗；
3)二次加樣：將第二標記物體系加入上述沉淀中，混合均勻，溫育，使上述沉淀與第二
標記物體系反應，形成雙抗夾心復合物；
4)檢測：外加磁場將上述雙抗夾心復合物沉淀，去除上清液，清洗后，加入發光底物，檢
測發出的相對光強度，計算得到HBsAg的含量。