本發(fā)明公開一種用于鴨坦布蘇病毒抗體的固相競爭ELISA檢測試劑盒。本發(fā)明的鴨坦布蘇病毒血清學(xué)檢測試劑盒包含有包被鴨坦布蘇病毒滅活抗原的ELISA板，兔抗鴨坦布蘇病毒的陽性血清、鴨抗鴨坦布蘇病毒的陽性對照血清和鴨陰性對照血清。采用本發(fā)明的試劑盒進(jìn)行檢測，可不分種屬的檢測鴨坦布蘇病毒易感動物血清，不僅可以高通量的檢測田間血清樣品，還可根據(jù)需要檢測樣品的抗體效價。同時，所提供的固相競爭ELISA試劑盒操作簡單，易于掌握；不需高端儀器設(shè)備，易于推廣；成本低，適于田間血清樣品檢測及實(shí)驗(yàn)室研究應(yīng)用。

1.一種鴨坦布蘇病毒抗體固相競爭ELISA檢測試劑盒制備方法，待Vero細(xì)胞生長密度達(dá)80%左右時，取-80℃保存的10^5?TCID₅₀的鴨坦布蘇病毒，冰上融化后用OPTI-MEM做5倍稀釋，取2.5mL感染75cm²細(xì)胞瓶中細(xì)胞，37℃孵育1小時，期間每15分鐘輕輕晃動2-3次，之后棄掉病毒感染液，再加入10mL?OPTI-MEM，最后置于37℃、5%?CO_2?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞發(fā)生病變，病變細(xì)胞漂浮后將細(xì)胞瓶置于-80℃，反復(fù)凍融3次，之后于4℃、8000rpm的條件下離心30分鐘去除細(xì)胞碎片，再將上清于4℃、35000rpm的條件下離心3小時，棄上清，用適量的PBS溶液懸浮沉淀，收集的病毒用2‰甲醛37℃過夜滅活，滅活后的鴨坦布蘇病毒用于包被ELISA板，其特征在于包被和封閉條件為：抗原濃度為10ng/μL，50μL/孔，4℃過夜；甩干ELISA板，再用PBST?100μL/孔，洗4遍；用2%BSA?100μL/孔封閉，37℃，1小時。2.權(quán)利要求1所述方法制備的鴨坦布蘇病毒抗體固相競爭ELISA檢測試劑盒。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鴨坦布蘇病毒抗體固相競爭ELISA檢測試劑盒，其特征在于試劑盒內(nèi)還含有兔抗鴨坦布蘇病毒的陽性血清、鴨抗鴨坦布蘇病毒的陽性對照血清和鴨陰性對照血清。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的鴨坦布蘇病毒抗體固相競爭ELISA檢測試劑盒，其特征在于試劑盒內(nèi)還有PBST溶液、TMB?A液、TMB?B液和終止液。