本發(fā)明提供了一種檢測硝基咪唑類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒，它含有：包被有甲硝唑偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板，酶標(biāo)抗抗體工作液，硝基咪唑類藥物特異性抗體工作液，甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)品溶液，底物顯色液，終止液，濃縮洗滌液，復(fù)溶液。本發(fā)明還公開了一種應(yīng)用上述酶聯(lián)免疫試劑盒檢測硝基咪唑類藥物的方法，它包括：首先進(jìn)行樣品前處理，然后用試劑盒進(jìn)行檢測，最后分析檢測結(jié)果。本發(fā)明提供的酶聯(lián)免疫試劑盒可用于檢測蜂蜜樣品中硝基咪唑類藥物的含量，其操作簡便、費(fèi)用低廉能夠現(xiàn)場監(jiān)控且適合大量樣本的篩查。

1.一種檢測樣品中硝基咪唑類藥物含量的方法，包括步驟：
(1)樣品前處理：
稱取3.0±0.05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯離心管中；加入3ml 0.1M碳酸鹽緩沖液充分溶解
蜂蜜；加入9ml乙酸乙酯，振蕩5min，3000g以上，室溫離心5min；取6ml上層有機(jī)相至50ml聚
苯乙烯離心管中，分別加入1ml乙酸乙酯，1ml甲醇，1ml正己烷，再加入2ml 2M氫氧化鈉溶
液，渦動(dòng)5min；3000g以上，室溫離心5min；移取4ml上層有機(jī)相至10ml干凈玻璃試管中，于50
～60℃水浴氮?dú)饬飨麓蹈?；加?ml正己烷，渦動(dòng)30s，加入0.5ml復(fù)溶液，渦動(dòng)1min，3000g以
上，室溫離心5min；除去上層有機(jī)相，取下層水相50μl用于分析；
(2)用試劑盒進(jìn)行檢測；
(3)分析檢測結(jié)果；
其特征在于所述試劑盒為檢測硝基咪唑類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒，它含有：
(1)包被甲硝唑偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板；
(2)用辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠抗抗體；
(3)硝基咪唑類藥物單克隆抗體工作液；
(4)甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)品溶液6瓶，濃度分別為0μg/L、0.05μg/L、0.15μg/L、0.6μg/L、2.4μg/L、
9.6μg/L；
(5)底物顯色液由A液和B液組成，底物顯色液A液為過氧化脲，底物顯色液B液為四甲基
聯(lián)苯胺；
(6)終止液為2mol/L鹽酸；
(7)濃縮洗滌液為pH7.2-7.6，含有0.5％-1.0％吐溫20，0.01‰-0.04‰疊氮化鈉的
0.1-0.2mol/L磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量百分比；
(8)復(fù)溶液為pH6.5-6.8，含有5％-10％酪蛋白的0.1-0.2mol/L磷酸鹽緩沖液，所述百
分比為重量百分比；
所述甲硝唑偶聯(lián)抗原是甲硝唑半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到；所述半抗原的制備步驟
為：0.85g甲硝唑和1.0g琥珀酸酐，加入10ml吡啶，室溫下攪拌12-20小時(shí)，蒸干溶劑，乙酸乙
酯溶解，飽和氯化銨溶液洗滌，水洗，干燥，除去溶劑后在環(huán)己烷-乙酸乙酯中重結(jié)晶得到白
色固體，為甲硝唑半抗原，所述甲硝唑半抗原結(jié)構(gòu)如下：

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述酶標(biāo)板在制備過程中所用的包被緩沖液
為pH9.0-9.6，0.1-0.2mol/L碳酸鹽緩沖液，所用的封閉液為pH7.2-7.6，含有0.5％-0.8％
脫脂奶粉的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量百分比。