1.一種篩選抗ras過度激活腫瘤藥物的試劑盒,其特征在于所述試劑盒包括以下試劑:
①試劑A:秀麗隱桿線蟲為多陰門突變體MT2124和MT301株系,所述秀麗隱桿線蟲為同
步化線蟲,秀麗隱桿線蟲同步化的步驟如下:用M9緩沖液將平板上的秀麗隱桿線蟲沖下來,
將沖洗液吸入離心管;4000rpm離心3min,去除上清;加入終濃度為3.2%NaClO和1M NaOH的
裂解液;在渦旋儀上震蕩7min,使秀麗隱桿線蟲的蟲體破裂釋放卵;4000rpm離心3min,去除
上清,收集沉淀獲得大量的秀麗隱桿線蟲卵;M9緩沖液沖洗兩次,加入1ml M9緩沖液,置于
20℃培養箱中孵化48小時;
②試劑B:大腸桿菌OP50。
2.根據權利要求1所述的一種篩選抗ras過度激活腫瘤藥物的試劑盒,其特征在于:所
述試劑B為含有大腸桿菌OP50活菌的凍干粉或菌液。
3.根據權利要求1所述的一種篩選抗ras過度激活腫瘤藥物的試劑盒,其特征在于:所
述秀麗隱桿線蟲的濃度為80—100條/20μl,大腸桿菌OP50的濃度為10mg/ml。
4.根據權利要求1所述的一種篩選抗ras過度激活腫瘤藥物的試劑盒,其特征在于:所
述試劑盒的使用方法如下:
使用96孔細胞培養板,每孔中的終體積為200μl;每孔加入160μl的待測藥液,加入20μl
秀麗隱桿線蟲液,再加入20μl大腸桿菌OP50菌液,每個處理設三個重復,放置到20℃生化培
養箱中培養;培養至成蟲后,在倒置顯微鏡下觀察秀麗隱桿線蟲野生型和突變體數目;野生
型%=100×野生型線蟲數/線蟲總數,與空白對照相比,野生型比率越高表示藥物抗腫瘤
的效果更好。
展開