本發明公開了一種人白細胞介素35酶聯免疫吸附測定試劑盒及其制備方法，所述的試劑盒包括小鼠抗IL-12p35單克隆抗體(包被抗體)、全長重組蛋白IL-35(標準品)、生物素化的小鼠抗IL-27EBI3單克隆抗體(檢測液A)、底物TMB和終止液。本發明試劑盒具有穩定性高和低毒性的優點，且實驗操作較RIA法及質譜法簡單、不需特殊防護、周期短，可以滿足普通實驗室的要求。

1.一種人白細胞介素35酶聯免疫吸附測定試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括：
包被抗體：小鼠抗IL-12p35單克隆抗體；
標準品：全長重組蛋白IL-35；
檢測液A：生物素化的小鼠抗IL-27EBI3單克隆抗體；
底物TMB和終止液；
其中，小鼠抗IL-12p35單克隆抗體的制備如下：
IL-12p35基因片段的擴增，參照的基因序列為Genebank號NM_000882.3，根據查到的基
因分別設計IL-12p35基因上下游引物，以人cDNA為模板擴增IL-12p35基因片段：
IL-12p35上游引物：5’-ACGCGTCGACAAAGAAACCTCCCCGTGGCCACTC-3’
IL-12p35下游引物：5’-CCGCTCGAGTTAGGAAGCATTCAGATAGCTCG-3’；
擴增條件：95℃預熱5分鐘；95℃變性30秒；56℃退火30秒；72℃延伸30秒；72℃終末延
伸10分鐘；30個循環，冷卻至4℃保存；
將上述擴增產物與載體連接，進行表達純化，純化得到的蛋白進行單克隆抗體的制備；
所述生物素化的小鼠抗IL-27EBI3單克隆抗體的制備方法包括如下步驟：
IL-27EBI3基因片段的擴增，參照的基因序列為Genebank號NM_005755.2；根據查到的
基因分別設計IL-27EBI3基因上下游引物，以人cDNA為模板擴增IL-27EBI3基因片段：
IL-27EBI3上游引物：5’-CGGAATTCAGGAAAGGGCCCCCAGCAGCTCTGA-3’
IL-27EBI3下游引物：5’-CCGCTCGAGTCACTACTTGCCCAGGCTCATTGTGGCA-3’；
擴增條件：95℃預熱5分鐘；95℃變性30秒；57℃退火30秒；72℃延伸30秒；72℃終末延
伸10分鐘；30個循環，冷卻至4℃保存；
將上述擴增產物與載體連接，進行表達純化，純化得到的蛋白進行單克隆抗體的制備。