本發明涉及生物技術和醫學檢測領域，旨在提供一種唾液抗線粒體抗體M2型的酶聯免疫檢測試劑盒。該試劑盒中包括下述組分：AMA?M2標準品；M2抗原包被的聚苯乙烯ELISA微孔板；酶標二抗：辣根過氧化物酶標記的抗人IgG；樣本稀釋液：質量濃度0.1％的BSA?PBS溶液；輔助試劑：底物顯色液、反應終止液和清洗緩沖液。本發明所用試劑盒使用更為簡便，能夠直接檢測體檢者唾液中的AMA?M2表達水平，是一種無創的檢測手段，解決了血液途徑檢測存在的不足。本發明能夠更加安全、方便、快捷地應用于PBC的篩查，輔助PBC的診斷，為后期疾病的治療和改善患者預后提供數據支持。

1.一種唾液抗線粒體抗體M2型的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒中包括
下述組分：
AMA-M2標準品；
M2抗原包被的聚苯乙烯ELISA微孔板；
酶標二抗：辣根過氧化物酶標記的抗人IgG；
樣本稀釋液：質量濃度0.1％的BSA-PBS溶液；
輔助試劑：底物顯色液、反應終止液和清洗緩沖液；
所述樣本稀釋液的配制方法為：取牛血清白蛋白1g，加入pH7.4的0.01M磷酸鹽緩沖溶
液1L，充分溶解；
所述底物顯色液為TMB/H₂O₂，是通過下述方法配制獲得：
(1)配制底物顯色液A：
取四甲基聯苯胺20mg、DMSO 2ml、EDTA-Na 20mg、檸檬酸95mg、甘油5ml，以ddH₂O定容至
50ml后混勻，避光保存；
(2)配制底物顯色液B：
取醋酸鈉1.36g、檸檬酸0.16g、30％過氧化氫30ul，以ddH₂O定容至50ml后混勻；
(3)使用前，將底物顯色液A、B液等體積混勻，即得底物顯色液TMB/H₂O₂；
所述反應終止液為：0.5M硫酸；
所述清洗緩沖液是質量濃度0.05％的Tween20-PBS溶液；其配制方法為：取吐溫
20500ul，加入pH7.4的0.01M磷酸鹽緩沖溶液1L，充分溶解。
2.權利要求1所述試劑盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將獲取的唾液樣本離心后吸取上清，用0.1％BSA-PBS溶液按1∶40的體積比稀釋；
(2)用樣本稀釋液稀釋AMA-M2標準品為8個梯度：AMA-M2含量分別為1RU/ml、0.50RU/
ml、0.25RU/ml、0.125RU/ml、0.0625RU/ml、0.03175RU/ml、0.015625RU/ml、0RU/ml；第8個
0RU/ml設為空白對照孔，直接采用樣本稀釋液；
(3)在M2抗原包被的聚苯乙烯ELISA微孔板中分別加入100ul稀釋好的標準品和樣本，
室溫孵育30分鐘；棄去孔中液體，每孔加300ul配好洗液，60秒后將微孔板中液體倒出，并在
吸水紙上拍打去除殘留液體，重復清洗3次；
(4)每孔加入100ul酶標二抗，室溫孵育30分鐘后，棄去孔中液體，清洗3次；
(5)每孔加入100ul顯色液，室溫孵育15分鐘，再以加顯色液的相同順序加入100ul終止
液終止反應；
(6)用酶標儀在450nm波長讀取OD值，以450nm平均吸光值為橫坐標，各標準品濃度為縱
坐標，繪制標準曲線，根據標準曲線換算出樣本中AMA-M2濃度。