本發(fā)明涉及生物技術(shù)和動物疫病診斷領(lǐng)域，具體公開了一種檢測鼻氣管鳥桿菌的試劑盒及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明提取B型鼻氣管炎鳥桿菌的脂多糖作為包被抗原，該純化的抗原對ORT具有很強(qiáng)的特異性、敏感性，可一次性實現(xiàn)對18個血清型ORT的檢測，能真實準(zhǔn)確地反應(yīng)雞群中ORT的抗體水平。本發(fā)明使用辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗禽IgG作為酶標(biāo)抗體，可廣泛針對禽類，如雞、鴨和鵝等進(jìn)行通用性的檢測，提高了本試劑盒的通用性。

1.B型鼻氣管炎鳥桿菌脂多糖在制備用于檢測多種血清型鼻氣管鳥桿菌的試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑盒包括：包被有鼻氣管鳥桿菌脂多糖的固相載體、酶標(biāo)抗體、鼻氣管鳥桿菌陰性對照血清和陽性對照血清；所述鼻氣管鳥桿菌脂多糖來自B型鼻氣管炎鳥桿菌；所述鼻氣管鳥桿菌脂多糖的制備方法為采用脂多糖提取試劑盒提取：(1)將B型鼻氣管炎鳥桿菌菌株活化，采用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基劃線培養(yǎng)，轉(zhuǎn)接入牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)；(2)獲取菌體培養(yǎng)物，離心，使用PBS重懸菌體沉淀；(3)向重懸菌體中加入裂解緩沖液，加入氯仿，室溫孵育，離心取上清，加入純化裂解液，混勻孵育，離心，洗滌，干燥后加入Tris-HCL，即得；所述包被有鼻氣管鳥桿菌脂多糖的固相載體的制備方法為：(1)向微孔板的每孔加入含43±5ug/ml B型ORT抗原的包被液，4℃過夜包被10-16h；(2)每孔加洗滌液進(jìn)行洗板；(3)向微孔板的每孔加入封閉液進(jìn)行封閉；(4)將微孔板放入恒溫恒濕箱，37℃放置2h；所述酶標(biāo)抗體為辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗禽IgG。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述封閉液為NaCl 8g，KCl 0.2g，Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g，KH₂PO₄ 0.2g，胎牛血清100mL，蔗糖30g，明膠2.0g，酪蛋白2.0g，硫柳汞0.03g，加純水定容至1L。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑盒還包括：洗滌緩沖液、樣本稀釋緩沖液、顯色液、終止液、底物液。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，使用酶標(biāo)抗體稀釋液稀釋酶標(biāo)抗體，所述酶標(biāo)抗體稀釋液為NaCl 8g，KCl 0.2g，Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g，KH₂PO₄ 0.2g，甘油10ml，馬血清100ml，酪蛋白3g，蔗糖1.5g，Triton X-100 2.5ml，硫柳汞0.03g，加純水定容至1L。