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人附睪上皮分泌蛋白4定量測定試劑盒及其檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-14
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310339059.9 
  • 技術(專利)名稱 人附睪上皮分泌蛋白4定量測定試劑盒及其檢測方法 
  • 項目單位 江蘇福隆生物技術有限公司
  • 發明人 奚偉紅,王布強,王京,史偉鋒,高淑舫 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 王開聿
  • 發布時間 2021-12-14  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及一種人附睪上皮分泌蛋白4定量測定試劑盒及其檢測方法,包括磁分離試劑的制備、酶反應物的制備、反應增強劑的配制、校準品稀釋液的配制、校準品和質控品的配制、清洗濃縮液的配制和底物溶液的配制七個步驟。本發明人附睪上皮分泌蛋白4定量測定試劑盒及其檢測方法具有較高的靈敏度和特異性,更短的獲得檢測結果的時間和更簡便的操作方式,對上皮性卵巢癌的早期診斷、療效監測以及預后判斷、降低卵巢癌患者的病死率中的具有重要應用價值。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種非診斷目的的人附睪上皮分泌蛋白4定量測定檢測方法,其特征在于所述檢測方法包括試劑準備過程和檢測步驟,所述試劑準備過程如下:步驟一、磁分離試劑的制備一、磁珠緩沖液配制(1)、稱取TRIS?4.58g和NaCl6.81g于1L容器中,然后稱取0.96g?TWEEN-20于20mL容器中加適量水使其完全溶解后,再倒入上述1L容器中;(2)、用移液器將?Proclin-300量取0.2mL于10mL純化水的燒杯中完全溶解后,倒入上述1L容器中,然后在上述?1L容器中加入?800mL純化水,充分攪拌;(3)、調節pH計測量其pH值,控制pH在7.95-8.05之間;(4)、稱取BSA?3g倒入上述1L容器中;(5)、最后1L容器定容至?1000mL,用0.2μm濾器過濾;過濾完后貼好標簽于2-8℃冷庫貯存;二、磁分離試劑的制備(1)、將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50μLDMSO中,取2mg抗HE4單克隆抗體溶于pH9.5的0.1mol/L的PB緩沖液中至總體積為1mL;(2)、確定辛二酸二琥珀酰亞胺酯的投入量,用移液槍吸取辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到上述HE4單克隆抗體溶液中,置室溫90min;(3)、然后將抗體溶液加入到Centricon-10濃縮管中,放入到高速冷凍離心機中在3000g下濃縮30min至體積為0.5mL;(4)、取0.5mL磁珠加入5mL反應杯中,放入專用試管架,經磁鐵吸附2分鐘后吸取上清;(5)、每次加入1.5mL?pH9.5的0.1mol/L的PB緩沖液,混勻30秒,上架,去上清,重復操作3次;將獲得的抗體溶液加入到上述磁珠中,混勻后室溫反應4小時;(6)、加入0.3mL?1mol/L的TRIS溶液?37℃15分鐘;(7)、每次加入1.5mL?pH7.2的0.1mol/L的PB緩沖液清洗已經標記的磁珠,混勻30秒,上架,去上清,重復操作3次;(8)、用100mL磁珠保存液將磁珠轉入125mL玻璃瓶,即為?0.05%的HE4磁分離試劑;磁珠保存液配方為0.1%?BSA,0.05%吐溫-20,0.02%NaN3,20%乙醇,4℃保存;(9)、將獲得的磁分離試劑用磁珠緩沖液按照1:1的比例混勻,即得磁分離試劑;步驟二、酶反應物的制備步驟三、反應增強劑的配制(1)、稱取TRIS1.56g和NaCl?4.23g于1L容器中;用移液器將?Proclin-300量取0.2mL于10mL純化水的燒杯中完全溶解后,倒入上述?1L容器中;(2)、用量筒量取800mL純化水于上述1L容器中,充分攪拌直至完全溶解,然后調pH值,控制pH在?7.35-7.45之間;(3)、稱取Mak33?0.9g于上述1L容器中;最后定容至1000mL,完全溶解后,用0.2μm濾器過濾;步驟四、校準品稀釋液的配制步驟五、校準品和質控品的配制步驟六、清洗濃縮液的配制(1)、稱取KCl4g、NaCl40g、蔗糖10g于1L容器中;(2)、稱取0.225g?Tween-20于100mL容器中加15mL水使其完全溶解后,倒入上述1L容器中;(3)、用移液器將Proclin-300量取0.225mL于盛有15mL純化水的燒杯中完全溶解后,倒入上述1L容器中;(4)、用量筒量取800mL純化水于上述1L容器中,充分攪拌直至完全溶解;(5)、調pH,控制其范圍在7.35-7.45之間;(6)、最后定容至1000mL,完全溶解后用0.2μm濾器過濾即得;步驟七、底物溶液的配制所述人附睪上皮分泌蛋白4的檢測步驟如下:(1)、加50μL人附睪上皮分泌蛋白4校準品、質控品、待測標本至對應微孔底部;(2)、加50μL酶反應物至每一微孔中;(3)、加50μL反應增強劑至每一微孔中;(4)、加50μL磁分離試劑至每一微孔中;(5)、用塑料薄膜覆蓋微孔,多管混勻器輕輕振蕩微孔板30s后,置37℃水浴30分鐘;(6)、微孔板放至磁分離器上,確保每個微孔都與分離器表面接觸,沉淀2分鐘;緩慢的倒轉分離器倒出上清液,把倒轉的微孔板連同分離器一起放在濾紙上,用力拍擊分離器底部以除去粘在微孔上的所有液滴;(7)、清洗濃縮液用純化水稀釋20倍后,加200μL稀釋后的清洗液至每一微孔中,置多管混勻器上輕輕振蕩混勻30s;加樣時應避免加樣力度過大而導致磁珠濺出,且混勻要徹底;(8)、重復步驟(6)、(7)、(6)一遍;(9)、加100μL底物溶液至微孔中混勻3秒,迅速用準備好的發光檢測儀進行檢測;(10)、以校準品濃度的Log值為橫坐標,RLU的Log值為縱坐標繪制出標準曲線,以各待測血清RLU值在標準曲線上查出該血清的HE4的濃度,其中縱坐標為發光強度,橫坐標為HE4濃度,單位為pmol/L。2.根據權利要求1所述的一種非診斷目的的人附睪上皮分泌蛋白4定量測定檢測方法,其特征在于所述底物溶液的制備包括以下步驟:一、底物溶液A的配制步驟(1)、稱取硼砂5.721g、硼酸2.474g、魯米諾1.0g和對碘苯酚0.1mg于1L燒杯中;(2)、用量筒量取400mL純化水于1L燒杯中,充分攪拌直至完全溶解,調pH,控制其范圍在7.95-8.05之間;(3)、用0.2μm濾器過濾收集濾液,用純化水定容至500mL,混勻后即得;二、底物溶液B的配制(1)、稱取硼砂5.721g、硼酸2.474g、過氧化脲0.1g和PC300?250μL于1L燒杯中;(2)、用量筒量取400mL純化水于1L燒杯中,充分攪拌直至完全溶解,調?pH控制其范圍在7.95-8.05之間;(3)、用0.2μm濾器過濾收集濾液,用純化水定容至500mL,混勻后即得。
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專利技術附圖

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