本發明屬于生物技術領域，公開了一種用于檢測單核苷酸多態性的引物和試劑盒，及單核苷酸多態性的檢測方法，該檢測方法包括以下步驟：1）直接將樣品分別裝入A管和B管，并與上述試劑盒所述試劑充分混合，所述A管裝有野生型正向引物或反向引物，B管裝有突變型正向引物或反向引物，所述A、B兩管內的其余成分相同；2）將步驟1）的混合液瞬時離心后進行熒光定量PCR擴增；3）根據A管擴增曲線Ct值與B管擴增曲線Ct值的差值△Ct判斷目標位點的基因類型。本發明所用樣品無須進行DNA提取，只需微量即可檢測的一管式反應，通過優化了引物設計，提高了檢測準確性。

1.CYP2C9基因*1和*3分型的方法，其特征在于，包括以下步驟，
在正向引物的3’端倒數第三個堿基引入錯配，由原來的腺嘌呤(A)變為胸腺嘧啶(T)，
倒數第二個堿基保持不變，序列如下：
野生型正向引物：5’-TGCACGAGGTCCAGAGATTGA-3’
突變型正向引物：5’-TGCACGAGGTCCAGAGATTGC-3’
反向引物：5’-TTTCTGAATTTAATGTCACAGGTCACT-3’
熒光探針：5’-TGACCTTCTCCCCACCAGCCTGC-3’
將1μl EDTA抗凝全血與DNA聚合酶，PCR反應緩沖液，dNTP，引物探針在兩個反應管內充
分混合；A管裝有野生型正向引物，反向引物和反向探針；B管裝有突變型正向引物，反向引
物和反向探針；兩個管內除了反向引物不同外，其余組分完全相同；每人份反應液25μl，包
含5μmol/L正、反向引物各1μl，5μmol/L探針0.5μl，10mmol/L dNTP 0.4μl，DNA聚合酶0.1μ
l，2×PCR反應緩沖液12μl，超純水9μl以及1μl全血；檢測采用ABI 7300熒光定量PCR儀；PCR
擴增檢測條件設為95℃5分鐘；98℃10秒，60℃熒光檢測40秒，45個循環。