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針對食品中的沙門氏菌的多重PCR檢測用引物組、試劑盒及檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-18
  • 技術成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201410276257.X 
  • 技術(專利)名稱 針對食品中的沙門氏菌的多重PCR檢測用引物組、試劑盒及檢測方法 
  • 項目單位 中糧營養健康研究院有限公司
  • 發明人 李慧,蔡軍,劉洋,石嵩,歐競堃,黃蔚霞 
  • 行業類別 健康用品-營養保健品
  • 技術成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 王香涵
  • 發布時間 2021-12-18  
  • 01

    項目簡介

    本發明適用于食品微生物安全檢測領域,提供了一種針對食品中的沙門氏菌的多重PCR檢測用引物組、試劑盒及檢測方法。本發明的多重PCR檢測用引物組、試劑盒及檢測方法通過組合利用沙門氏菌的種屬特異性鑒別基因(具體為侵襲相關基因和侵襲基因調節相關基因),可實現檢測覆蓋范圍廣、特異性強且靈敏度高的技術效果,并且檢測耗時短、操作較簡單、設備要求低,可以節省大量的人力、物力和財力,適合快速檢測的要求,易于在實際生產中推廣應用。
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  • 02

    說明書

    1.一種對食品中的沙門氏菌進行檢測的方法,所述方法包括以下步驟:a)從所述食品中獲取模板DNA的前處理步驟;b)使用多重PCR檢測用引物組或包含所述多重PCR檢測用引物組的多重PCR檢測用試劑盒對所述模板DNA進行多重PCR擴增的步驟;c)對擴增產物進行檢測的步驟,從而對所述食品中沙門氏菌的存在及含量進行分析,其中,所述引物組包括如下引物對:invA基因擴增用引物對:invA-F:TTGACGAGCTTTATCATTGTCTG;invA-R:ACGTCTTTTTCTCTTGGTGCC,以及hilA基因擴增用引物對:hilA-F:TGAATTACGCTCACAACACCTG;hilA-R:TGCTAAGCAACCAGATTACGATG,并且其中,在步驟b)中,所述多重PCR擴增的反應體系為:以總體積為25μL計,加入濃度為1pg/μL~100ng/μL的模板DNA1μL;所述多重PCR擴增的反應條件為:95℃預變性2min;94℃變性15s,55℃退火15s,72℃延伸30s,共進行35個循環;72℃延伸7min。2.根據權利要求1所述的方法,其中,所述多重PCR檢測用試劑盒進一步包含具有如下成分的PCR反應基礎溶液:Tris-HCl;KCl;MgCl2;dATP、dTTP、dGTP及dCTP;以及Taq DNA聚合酶。3.根據權利要求2所述的方法,其中,在所述多重PCR檢測用試劑盒中,各成分以如下濃度包含于25μL的PCR最終反應溶液中: 4.根據權利要求3所述的方法,其中,在所述多重PCR檢測用試劑盒中,各成分以如下濃度包含于25μL的PCR最終反應溶液中: 5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法,其中,所述多重PCR檢測用試劑盒進一步包含陰性對照DNA和陽性對照DNA。6.根據權利要求5所述的方法,其中,所述陰性對照DNA來自大腸桿菌菌株CGMCC1.3373,所述陽性對照DNA來自腸炎沙門氏菌菌株CICC 21482。7.根據權利要求1-4中任一項所述的方法,其中,所述方法進一步包括在步驟a)之前對所述食品進行沙門氏菌富集培養的步驟。8.根據權利要求7所述的方法,其中,所述富集培養的步驟采用緩沖蛋白胨水培養基對所述食品進行沙門氏菌富集培養,培養溫度為37±1℃,培養時間為12-15小時。9.根據權利要求1-4中任一項所述的方法,其中,所述前處理步驟為:采用細菌基因組DNA提取試劑盒提取法或水煮裂解法從所述食品中獲取模板DNA。10.根據權利要求9所述的方法,其中,所述細菌基因組DNA提取試劑盒提取法包括如下步驟:采用OMEGA細菌基因組DNA提取試劑盒提取沙門氏菌的基因組DNA,用NanoDrop 2000超微量分光光度計測定濃度,分裝后備用。
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專利技術附圖

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